BIOQUÍMICA CLÍNICA
Intervalos de referencia para la b2 microglobulina sérica empleando dos enzimoinmunoensayos
Reference intervals of serum b2 microglobulin using two different immunoassays
Andrea Elena Larregina1 a, Juan Tentoni2 b, Paula Mariela Bermúdez2 b, Alejandra Larregina1 a, b y Nélida Nora Polini2 b, c
1. Bioquímica
2. Doctor en Bioquímica
3. Médica Especialista en Hematología
a) IACA Laboratorios, San Martín 68,
(8000) Bahía Blanca
b) Unidad de Hematología y Hemoterapia
del Hospital Municipal de Agudos "Dr.
Leónidas Lucero", Estomba 964, (8000)
Bahía Blanca
c) Departamento de Biología, Bioquímica
y Farmacia de la Universidad Nacional
del Sur, San Juan 670, (8000) Bahía
Blanca
Resumen
La obtención de un intervalo de referencia es importante para la correcta interpretación de los resultados, toma de decisiones y seguimiento clínico de los pacientes que integran la población del lugar. Los objetivos de este trabajo fueron obtener y validar los intervalos de referencia de la b2 microglobulina sérica en la ciudad de Bahía Blanca. Se emplearon simultáneamente dos ensayos inmunoenzimáticos. Como población de referencia se tomaron individuos que concurrieron a donar sangre a la Unidad de Hematología y Hemoterapia del Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero" y estudiantes de Bioquímica de la Universidad Nacional del Sur, previo interrogatorio para descartar posibles alteraciones preanalíticas. A la muestra de referencia seleccionada se le extrajo sangre venosa. Los intervalos de referencia obtenidos fueron de 0,78 a 1,47 mg/L para el primer método y de 1,18 a 2,36 mg/L para el segundo. En el primer caso el rango obtenido no coincidió con el reportado por el fabricante. Los dos métodos no resultaron comparables ni en exactitud ni en precisión. De este estudio se desprende que cada sistema de medición debería informarse con su correspondiente intervalo de referencia.
Palabras clave: b2 microglobulina; Intervalos de referencia
Summary
The creation of a reference interval is important for the accurate diagnosis and prognosis on the local population. The aims of this study were to determine and verify the reference interval of serum b2 microglobulin in Bahia Blanca. Two different immunoenzymatic assays were used simultaneously. The reference population was taken among volunteer blood donors who donated at the Hematology and Hemotheraphy Unit of the Hospital Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero", and Biochemistry students from the Universidad Nacional del Sur. Preanalytical alterations were ruled out using a questionnaire, and afterwards, venous blood samples were obtained. The calculated reference intervals were 0.78 to 1.47 mg/L and 1.18 to 2.36 mg/L for each method respectively. In the first case, it disagreed with that reported by the manufacturer. None of the assays was comparable, neither in accuracy nor in precision. This study shows that each measurement system should be informed with its corresponding reference interval.
Key words: b2 microglobulin; Reference intervals
Introducción
La b2 microglobulina (b2m) fue descubierta en
1968 e identificada como la cadena liviana de los antígenos
de histocompatibilidad de clase I (1). Está codificada
en el cromosoma 16 y pertenece a la superfamilia
de las inmunoglobulinas. Estos antígenos están
en la membrana celular de todas las células nucleadas.
No se conoce totalmente su función pero se cree
que participan en la síntesis de las proteínas transmembrana
(2-4).
El 95% de la proteína es eliminada por filtración
glomerular, pero el túbulo proximal reabsorbe el 99%
por endocitosis, por lo que un aumento superior a
370 μg en orina de 24 horas es evidencia de disfunción
tubular (5)(6).
Se ha observado un aumento de la tasa de síntesis
o liberación hacia el pool sérico, así como de la velocidad
de su aclaración en diversas patologías como enfermedad
de Wilson; anemia de Fanconi; galactosemia
congénita; nefrocalcinosis; artritis reumatoidea;
nefritis intersticial; nefrotoxicidad por: metales pesados,
ciclosporina, aminoglucosidos, cisplatino y también
en los transplantados de riñón (7)(8).
En cambio, su aumento en pacientes con función
renal normal, sugeriría un incremento de producción
y/o liberación como en las enfermedades linfoproliferativas
(mieloma múltiple, linfomas Hogdkin y
no Hogdkin y leucemia linfocítica crónica), lupus
eritematoso, artritis reumatoidea, síndrome de Sjögern,
infección por citomegalovirus, hepatitis viral,
Epstein Barr, transplantados renales y pacientes dializados
(9-11).
La obtención de un intervalo de referencia es importante
para la correcta interpretación de los resultados,
toma de decisiones y seguimiento clínico de los
pacientes que integran la población del lugar donde
se ejerce la profesión (12)(13).
El objetivo de este trabajo fue obtener un intervalo
de referencia para la b2m en esta población y realizar
el análisis comparativo de dos métodos para interpretar
correctamente los resultados.
Materiales y Métodos
DISEÑO DEL ESTUDIO
Se trata de un estudio prospectivo tipo cohorte.
POBLACIÓN
La muestra de referencia fue seleccionada de la población
general que concurrió a donar sangre a la
Unidad de Hematología y Hemoterapia del Hospital
Municipal de Agudos "Dr. Leónidas Lucero" así como
de estudiantes de la carrera de Bioquímica de la Universidad
Nacional del Sur, clínicamente sanos. Se incluyeron
126 individuos (61 hombres y 65 mujeres),
con consentimiento informado.
Los criterios de exclusión fueron: edad menor de 18 y
mayor de 65 años, antecedentes patológicos, embarazo
y lactancia, ingesta de medicamentos, exposición
laboral a tóxicos e individuos fumadores.
MUESTRA
Se recolectaron 5 mL de sangre venosa por punción en la vena antecubital, entre las 8 y las 10 horas, con el paciente un reposo durante al menos 15 minutos y con un ayuno entre 8 a 12 horas. Se descartaron las muestras lipémicas o hemolizadas. Cada muestra se recolectó en tubos con acelerador DVS y se dejó a temperatura ambiente 30 min, centrifugándose luego por 15 min a 3.000 rpm, antes de la hora de extracción. El suero obtenido se fraccionó en tubos plásticos y se conservó a -20 ºC hasta su procesamiento. El período de conservación máximo fue de 15 días.
EQUIPOS DIAGNÓSTICOS EMPLEADOS
Equipo 1 = Enzimoinmunoensayo de micropartículas
MEIA de Abbott utilizando un analizador automático
AXSYM (Illinois-EE.UU.).
Equipo 2 = Enzimoinmunométrico por quimioluminiscencia
en fase sólida utilizando el analizador automático
IMMULITE / IMMULITE 1000 (Los Angeles,
EE.UU.).
Se empleó igual lote de reactivos para cada marca y
sendas calibraciones, analizándose durante un período
de 18 días la misma muestra en replicados de a 2.
Se realizaron estudios de la precisión y exactitud
de los dos sistemas comerciales.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Se calcularon los intervalos de referencia mediante métodos no paramétricos siguiendo los lineamientos de la guía NCCLS C28-A2, mediante el uso de los percentiles 2,5% y 97,5% (14). Se excluyeron previamente los valores aberrantes por la observación de los histogramas (Figs. 1 y 2), regla del espacio intercuartílico y test de Dixon (15).
Figura 1. Histograma de frecuencia de la ß2m sérica utilizando el
equipo comercial AXSYM (n:126).
Figura 2. Histograma de frecuencia de la b2m sérica utilizando el
equipo comercial IMMULITE (n:126).
Para la comparación de precisión y exactitud se utilizaron
las pruebas F de Snedecor y t de Student respectivamente,
previa comprobación de la homogeneidad de
las muestras según el test de Kolmogorov-Smirnoff (16).
El laboratorio posee un Sistema de Gestión de Calidad
que cumple con los requisitos de la norma ISO
9001:2000, se encuentra acreditado por la Fundación
Bioquímica Argentina y participa activamente en programas
externos de calidad.
Resultados
Los estudios de las precisiones de cada método arrojaron resultados aceptables para el analito medido (Tabla I). Los métodos no resultaron comparables en su exactitud (Prueba t de Student t: -15,5, p<0,001) ni en su precisión (Prueba F de Snedecor F: 2,96, p< 0,05). Los resultados obtenidos justificaron la obtención de intervalos de referencia para cada método. Finalmente se compararon los intervalos de referencia obtenidos con los provistos por ambas empresas comerciales (Tabla II).
Tabla I. Resultados del estudio de precisión analítica en ambos métodos.
Tabla II. Intervalos de referencia hallados para cada método.
Discusión y Conclusiones
Los intervalos de referencia obtenidos por cada
equipo no resultaron intercambiables.
Si se emplea el método del equipo AXSYM, se debe
utilizar el IR obtenido pues no se verifica el provisto
por el fabricante. La información aportada por esta casa
comercial es sobre una muestra no representativa de
individuos (n=50) en donde no se especifica ni el sexo
ni la edad de los mismos. Además, se utilizan medidas
paramétricas de centralización y dispersión (media:
0,99 mg/L y desvio estándar: 0,16 mg/L). El nuevo IR
hallado en este trabajo, con un rango de 0,69 mg/L,
disminuye el número de falsos positivos, coincidiendo
este hallazgo con una población clínicamente normal.
En cambio, si se emplea el método del equipo IMMULITE
se puede utilizar el IR declarado por el fabricante.
Esta concordancia se debería probablemente a
que la población estudiada es estadísticamente representativa,
se detalla la edad y el sexo (n=794: 424 varones y 370 mujeres entre 20 y 70 años) y brinda información
en percentiles. El nuevo IR hallado en este trabajo,
si bien su rango de 1,18 mg/L es menor, no tiene
significación clínica puesto que el corrimiento es
hacia valores inferiores normales.
La mayor imprecisión observada en el sistema IMMULITE
podría deberse a la dilución manual previa
de la muestra.
Los intervalos de referencia hallados para la b2 microglobulina
sérica permitirán la toma de decisiones clínicas
correctas, evitando el uso de los proporcionados
por los fabricantes, obtenidos con otras poblaciones.
CORRESPONDENCIA
PROF. DRA. NÉLIDA N POLINI
Rodríguez 1335
B8001FFE BAHÍA BLANCA, Provincia de Buenos Aires
E-mail: nnpolini@uns.edu.ar
1. Berggard I, Beam AG. Isolation and properties of low molecular weigth b2 -globulin occurring in human biological fluids. J Biol Chem 1968; 243: 4095-103.
2. Rodgers JR, Cook RG. MHC class Ib molecules bridge innate and acquired immunity. Nat Rev Immunol 2005; 5: 459-71.
3. Maenaka K, Jones EY. MHC superfamily structure and the immune system. Curr Opin Struct Biol 1999; 9: 745-53.
4. Horton R, Wilming L, Rand V, Lovering RC, Bruford EA, Khodiyar VK, et al. Gene map of the extended human MCH. Nat Rev Genet 2004; 5: 889-99.
5. Fields B, Sollinger H, Glass N, Carlson I, Belzer F. Beta 2 microglobulin versus creatinine as the sole indicator of rejection in renal transplants. Transplant Proc 1984; 16: 1591-3.
6. Gazapo E, Gazapo RM, Caturla A. Utilidad clínica de la determinación de beta-2-microglobulina. Med Clin (Barc) 1996; 106: 751-5.
7. Schentag J, Stutfin T, Plaut M, Jusko W. Early detection of aminoglycoside nephrotoxity with urinary b2- microglobulin. J Med 1978; 9: 201-10.
8. Cooper E, Forbes M, Hammbling M. Serum b2-microglobulin and C-reactive protein concentration in viral infection. J Clin Pathol 1984; 37(10): 1140-3.
9. Vives Corrons JL, Pujades A, Urbano-Ispizua A, Matutes E, Feliu E, Aguilar JL. Contribución de la genética molecular al diagnóstico de la leucemia aguda y síndromes linfoproliferativos crónicos a propósito de 121 casos. Med Clin (Barc) 1992; 98: 81-4.
10. Greipp PR, San Miguel J, Durie BG, Crowley JJ, Barlogie B, Bladé J, et al. International Staging System for Multiple Myeloma. JCO 2005; 23: 3412-20.
11. Elefsiniotis IS, Moulakakis A, Pantazis KD, Glynou I, Ketikoglou I, Vezali E, et al. Relationship between serum b2-microglobulin levels and virological breakthroughin HbeAg-negative chronic hepatitis B patients, under long-term treatment schedules including lamivudine. World J Gatroenterol 2005; 11 (3): 1822-8.
12. Sasse EA. Valores de referencia. En: Niño HV, Barrera LA. Garantía de Calidad en el Laboratorio Clínico. México DF: Panamericana; 1993. p. 45-67.
13. Uldall A. Garantía de Calidad en Química Clínica. La Plata: Federación Bioquímica de la Provincia de Buenos Aires; 1991.
14. National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory: approved guideline. NCCLS document C-28. Villanova, PA; 1995.
15. Ventimiglia F, Fink NE. Intervalos de referencia: Metodología para su creación y verificación. Acta Bioquím Clín Latinoam 2002; 36: 223-33.
16. Dawson-Saunders B, Trapp RG. Estimación y comparación de medias. En: Dawson-Saunders B, Trapp RG. Bioestadistica médica. 2º Ed. México DF: El Manual Moderno; 1994. p. 119-47.
Aceptado para su publicación el 13 de octubre de 2008