MICROBIOLOGÍA
Brucelosis en el zorro gris pampeano (Pseudalopex gymnocercus) en la provincia de La Pampa (Argentina)
Brucelosis in the grey fox of the pampas (Pseudalopex gymnocercus) in La Pampa province (Argentina)
Lumila Fuchs1 *, Valeria Baldone1 *, Marcelo Fort2 *, María del Carmen Rojas1 **, Luis Samartino3 ***, Hugo Giménez4 *
1. Lic. en Ciencias Biológicas
2. MSc
3. PhD
4. Técnico Superior en Laboratorio
* EEA INTA Anguil, Ruta 5 km 580 CP
(6326), Anguil, La Pampa, Argentina.
** INTA, Cuenca del Salado. Av Belgrano
416. CP (7203). Rauch. Bs. As. Argentina.
*** EEA INTA-CCV y A, Instituto de Patobiología. Área Bacteriología. CC 77 (1708) Morón.
Bs. As. Argentina.
Resumen
Brucella abortus (Br abortus) es una de las principales causas de abortos y pérdidas reproductivas en el ganado bovino. Los fetos abortados y sus fluidos fetales son la mayor fuente de infección. Es así como la enfermedad puede llegar a animales silvestres cuando ingieren esos tejidos. El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia serológica de brucelosis en el zorro gris pampeano (Pseudalopex gymnocercus). Se tomaron muestras de sangre de 41 zorros de la región centro-este de la provincia de La Pampa, Argentina. Para determinar la presencia de anticuerpos específicos contra Br abortus se utilizaron las Pruebas de Polarización de la Fluorescencia (FPA), Seroaglutinación en Microplaca (SAP) y Seroaglutinación en Microplaca con 2-mercaptoetanol (2-ME). Sobre un total de 41 sueros procesados por FPA, en 7 (17,1%) se detectaron anticuerpos contra Br abortus. Sólo 34 sueros fueron analizados por las pruebas de SAP y 2-ME, encontrando 5 (14,7%) y 4 (11,8%) muestras positivas, respectivamente. Los resultados permiten inferir que el zorro gris pampeano es susceptible a infectarse con Br. abortus a una tasa de incidencia importante. Es necesario realizar futuros estudios para establecer el rol del zorro en la transmisión de la enfermedad y sus consecuencias en esta especie.
Palabras clave: Brucella abortus; Pseudalopex gymnocercus; Zorro gris; Polarización de fluorescencia; La Pampa (Argentina)
Summary
Brucellosis is produced by several species of Brucella. Brucella abortus causes abortion and reproductive loss in bovine cattle. In the epidemiology of brucellosis, aborted fetus and their fetal fluids are the main source of infection and dissemination. Although the biological cycle and the disease consequences to domestic cattle have been widely studied, it is not the case with wild fauna. The objective of this study was to determine the serologic prevalence to brucellosis in the grey fox of the pampas (Pseudalopex gymnocercus). To that purpose, 41 foxes were sampled in the centre-east area of La Pampa province (Argentina). Blood samples for serologic studies were collected. A test of agglutination in microplate (SAP), another SAP with the addition of 2-mercapto-etanol (2-ME) and a test of polarization of the fluorescence (FPA) were used for the diagnosis of antibodies against Brucella abortus. For this, 17.1%, 14.7% and 11.8% was the prevalence found by FPA, SAP and SAP with 2-ME. More studies will be necessary to know the role of foxes in disease transmission and maintenance as well as the consequence of the diseases in foxes.
Key words: Brucella abortus; Pseudalopex gymnocercus; Grey fox; Polarization of fluorescence; La Pampa (Argentina)
Introducción
La brucelosis es una enfermedad infecciosa crónica
de los animales y el hombre extendida por todo el
mundo. El papel que pueden desempeñar los zorros y
otros animales silvestres en la epizootiología de la brucelosis
está aún en discusión y no se sabe realmente
qué importancia tienen estos animales en la diseminación
y mantenimiento de la enfermedad.
La presencia de brucelosis en zorros colorados (Vulpes
vulpes), en su hábitat natural, fue comprobada en
Bulgaria (1) cuando se encontraron 16 zorros con títulos
positivos (3,64%), sobre un total de 440 zorros
analizados. También se aisló una cepa de Brucella suis de uno de éstos. La susceptibilidad a esta enfermedad
en el zorro también ha sido comprobada en varias ocasiones
en Polonia y en el territorio que antes conformaba
la Unión Soviética en criaderos de zorros, alimentados
con vísceras, fetos y carnes de animales
domésticos infectados (2).
Entre los años 1962 y 1964 (3) se realizaron pruebas
de aglutinación en 728 sueros de zorro gris pampeano
(Pseudalopex gymnocercus - "Dusycion gymnocercus" ) y zorro
gris (Dusycion griseus), que se capturaron en las provincias
de Buenos Aires y Río Negro. De los zorros examinados,
173 (23,8%) tuvieron títulos de 1:25 a 1:800
y 82 de éstos (11,3% del total) tuvieron títulos de 1:100
o más. En la región pampeana, donde habita el zorro
gris pampeano, el 25,4% de los 410 animales examinados
dieron títulos de aglutinación de 1:25 o más y el
13,9% del total, de 1:100 o más. En la región del norte
de la Patagonia, donde habita el zorro gris, el porcentaje
de reacciones a 1:100 o más, fue inferior al obtenido
en la región pampeana (7,9%).
En la región patagónica argentina se encontró una
prevalencia del 28% a Brucella sp. sobre un total de 28
zorros colorados (Dusicyon culpaeus) y un 12% de prevalencia
en el zorro gris (Dusycion griseus) sobre una
muestra de 58 animales (4).
A pesar de todos los trabajos realizados, aún no se
puede asegurar hasta qué grado los zorros infectados
pueden contribuir a diseminar la brucelosis entre ellos
mismos y entre otras especies.
El objetivo de este trabajo fue determinar si el zorro
gris pampeano se hallaba expuesto a Brucella sp. en la
provincia de La Pampa.
Materiales y Métodos
El muestreo se realizó durante un año, en el periodo
comprendido entre febrero de 2004 y febrero de
2005 y el número de sueros obtenidos procedió de 41
zorros. Los mismos se capturaron en establecimientos
ganaderos ubicados en distintas localidades del centro-
este de la provincia de La Pampa. También se incluyeron
en el análisis los animales procedentes de un
acopiador y zorros que se encontraron muertos sobre
la ruta.
Los animales capturados con jaulas trampa se adormecieron
con una inyección intramuscular de un
anestésico veterinario (solución de maleato de acepromazina
y clorhidrato de ketamina), la dosis utilizada
fue de 1 mL por cada 5 kg de peso (dosis canina). Posterior
a ello, se realizó la extracción de sangre de la vena
cefálica antebraquial o de la safena, luego se extrajo
el suero por centrifugación y se conservó a -20 ºC
hasta su procesamiento.
En el caso de animales procedentes de acopiadores,
las muestras de suero estaban contaminadas debido al
gran tiempo transcurrido entre la muerte del animal y
la extracción de la sangre, por lo que a algunos sueros
fue necesario someterlos a un tratamiento con una solución
Borato-Salino y Kaolín (BSK) para limpiarlos;
luego de la realización del mismo, los sueros quedaron
diluidos 1/5.
Las técnicas serológicas utilizadas fueron: Prueba de
Fijación del Complemento (FC) (5), Prueba de Polarización (FPA) (6) y Pruebas de Aglutinación en Microplaca
con y sin agregado de 2-ME (2-mercaptoetanol)
(SAP y SAP 2-ME) (7). También se aplicaron la Prueba
de Seroaglutinación Lenta en Tubo y la Seroaglutinación
Lenta en Tubo con 2-ME (SAT y SAT con 2-ME).
Para la determinación de anticuerpos contra Brucella
canis se utilizó una Prueba de Aglutinación en Placa (8).
Para el análisis estadístico de los resultados, se utilizó la opción EPITABLE del programa Epi-Info 6.4. Se
calcularon las medias y los intervalos de confianza, los
niveles de asociación entre las variables se evaluaron
por la prueba de Chi-cuadrado. Para comparar las distintas
técnicas de brucelosis se utilizó el Test de Concordancia
de Diagnóstico (kappa) y la Proporción de
conformidad observada.
Resultados
De los 41 sueros analizados con la prueba de FPA, 7
fueron positivos (17,10%; IC: 7,78-30,88). El punto de
corte a partir del cual se consideraron los sueros como
positivos fue de 100 mp (unidades de minipolarización).
La media de las unidades de polarización de los
sueros que resultaron negativos fue de 68 mp y la de
los positivos de 149 mp.
De los zorros positivos, 3 eran hembras y 4 machos,
por lo que no se puede inferir ninguna asociación entre
enfermedad y sexo.
Se analizaron 34 sueros por la técnica de Aglutinación
en Microplaca con solución fisiológica, resultando
4 (11,76%; IC: 3,84-28,40) y 5 (14,7%; IC:5,59-
29,63) positivos con y sin el agregado de 2-ME,
respectivamente.
Al comparar los resultados obtenidos con SAP y
2-ME, se observa que los animales Nº 7, 18, 31 y 44 presentan
una infección tardía a brucelosis ya que fueron
positivos mediante las 2 metodologías; no sucedió lo
mismo para el zorro Nº 45 que resultó positivo mediante
SAP pero negativos para 2-ME, indicando de este
modo una infección reciente. En algunos de los sueros
que habían resultado positivo por alguna de las
técnicas antes mencionadas, se realizó la prueba de
aglutinación en tubo. Sin embargo, no fue posible realizarla
en todos los zorros positivos, debido a la escasez
de suero.
En la Tabla I se pueden observar los animales que
resultaron positivos con una o varias técnicas y sus respectivos
valores
Tabla I. Comparación de las técnicas de diagnóstico de brucelosis en el zorro gris pampeano.
Si comparamos la FPA con la aglutinación en microplaca, tanto con solución fisiológica como con 2- ME, se observa que de los 34 sueros analizados, 5 resultaron positivos con ambas técnicas, 2 positivos con FPA pero negativos con la aglutinación en microplaca y los 27 restantes negativos con ambas técnicas. El test de concordancia de diagnóstico (kappa) arrojó un resultado de 0,80 y la proporción de conformidad observada fue de 0,94 (Tabla II).
Tabla II. Comparación de técnicas de diagnóstico de brucelosis en
el zorro gris pampeano.
Por la técnica de Fijación de Complemento se procesaron
10 sueros tratados con la solución de BKS y los
mismos 10 sin tratar, todos resultaron anticomplementarios,
por lo que no se aplicó la técnica para el resto
de los sueros.
Para el estudio de seroprevalencia a Brucella canis se
procesaron 41 sueros y todos resultaron negativos.
Discusión y Conclusiones
El estudio serológico llevado a cabo en el zorro
gris pampeano en la provincia de La Pampa demuestra
que las seroprevalencias encontradas a Br abortus.
fueron similares en todas las técnicas utilizadas, ya
que el porcentaje de muestras positivas con FPA fue
del 17,1% sobre un total de 41 sueros. Mediante SAP
se observó un 17,7% y 14,7% de sueros positivos con
y sin el agregado de 2-ME respectivamente, sobre un
total de 34 sueros.
Los valores encontrados son altos si se los compara
con los que se obtuvieron en el zorro colorado
(3,63%) (1), si bien cabe mencionar que el tamaño de
la muestra en este caso fue mucho mayor (n=440).
Hay que mencionar que en Europa es bien conocido
que el zorro colorado es reservorio de la enfermedad,
y por ende en estos países existe una política de control
y erradicación de la brucelosis no sólo en el ganado
doméstico sino también en el silvestre, es por ello
que es lógico que la prevalencia de la enfermedad sea
menor que en nuestro caso. Es así como estos resultados
se aproximan más a los que encontraron en el zorro
gris pampeano en la provincia de Bs. As. (3), que
mostraron una prevalencia del 25,4% (títulos de aglutinación
1:25) sobre una muestra de 410 individuos.
Se puede inferir que la brucelosis de los zorros proviene
de los animales domésticos y llega a ellos a través de
la ingestión de fetos, vísceras o restos de animales infectados.
Lo que aún no se sabe es si esta infección
puede permanecer de manera independiente en zorros
silvestres y si éstos pueden transmitirla nuevamente
a las especies domésticas. Una ruta posible sería a
través de la ingesta de pasturas contaminadas con heces
o fluidos de zorros infectados con Brucella sp.
En lo que se refiere a la prevalencia de la infección
según el sexo no se registró ninguna relación coincidiendo
de este modo con lo que hallaron Szyfres y Gonzalez
Tomé en su trabajo (3). Los resultados no concuerdan
con lo que establece el trabajo de Rementzova
(2), que encuentra que las hembras de zorros colorados
son más susceptibles de infectarse que los machos. Sería
posible pensar que en la epidemiología de la brucelosis
en el zorro gris pampeano, la transmisión madre-hijo
sea poco probable y que éste actúe sólo como reservorio
de la enfermedad. Asimismo, no se puede inferir
ninguna relación entre los animales que estuvieron en
contacto con Brucella sp. y su lugar de procedencia debido
a que el tamaño de la muestra fue pequeño y la
misma fue sesgada. Sin embargo, se puede mencionar
que el zorro Nº 44, proveniente de la localidad de Rolón,
fue el que presentó los títulos más altos (400/200)
mediante SAP y SAT y otro animal que se capturó en el
mismo establecimiento (Z Nº 45), también resultó positivo
a Brucella. Se podría suponer que en esta área los
animales se encuentran más expuestos a la enfermedad;
ello sería muy probable ya que es una zona de tambos
donde la presencia de abortos y de fluidos fetales son
más frecuentes que en otras regiones, existiendo aquí una fuente potencial de infección.
En la mayoría de los trabajos que se han realizado
en brucelosis para fauna silvestre, la técnica serológica
más utilizada siempre ha sido la seroaglutinación en
placa o en tubo. No se han encontrado en la bibliografía
consultada trabajos en animales silvestres que hayan
utilizado la técnica de FPA para la detección de
brucelosis. Sin embargo, la utilización de esta técnica
en este trabajo resultó ser muy eficaz, ya que detectó los mismos sueros positivos que la Técnica de Aglutinación
en Microplaca. Cabe mencionar que en los casos
de los zorros Nº 12 y 32, cuyos sueros estaban muy
hemolizados, la técnica de SAP en microplaca dio resultados
negativos; por el contrario, la técnica de FPA
los detectó como positivos. Una posible explicación a
esta diferencia entre los resultados puede ser que el estado
de los sueros no afecte la lectura de los resultados
en la FPA pero sí en los de SAP en microplaca donde
la hemólisis de los sueros interferiría en la lectura o interpretación
de los resultados. Se puede decir entonces
que existe alta concordancia entre las técnicas, lo
que se ve reflejado con su valor de kappa que es de
0,80, por lo que se puede afirmar que la FPA, aunque
no esté validada para su uso en animales silvestres, resulta
ser una buena técnica para la detección serológica
de Br abortus en el zorro gris pampeano. Sería necesario
realizar en el futuro trabajos con muestreos
mayores para corroborar la eficacia de la técnica.
En lo que se refiere a la técnica de FC, en este caso
no resultó ser una buena técnica para detección de anticuerpos
a Brucella sp. en el zorro. Ello puede deberse
al mal estado de los sueros.
Dentro de la fauna silvestre, los zorros son los que
más semejanzas presentan con los perros, no sólo en
su fisonomía sino también en su comportamiento. Si
se piensa en los perros de áreas rurales, estos viven en
territorios similares y conviven tanto unos como otros
con el ganado doméstico y otras especies de la fauna
silvestre. Como consecuencia, los zorros podrían estar
expuestos a las mismas enfermedades que los perros y
por ello se investigó la presencia de anticuerpos contra
Br. canis en el zorro. Como los resultados de las 41
muestras que se procesaron fueron negativos, se debe
concluir que el zorro gris pampeano no se halla expuesto
a la enfermedad, al menos en esta zona. Esto
podría deberse a que el zorro en realidad no resulta
susceptible a la enfermedad o que la misma no se encuentra
diseminada en el área de estudio. No se hallaron
trabajos de cánidos silvestres con seroprevalencia
a Br canis, coincidiendo de este modo con los resultados
obtenidos en este trabajo.
Como conclusión se puede decir que la infección a
Brucella abortus en los zorros grises pampeanos en la
zona centro-este de la provincia de La Pampa fue corroborada
en este trabajo. La técnica de FPA resultó ser muy eficaz para la detección de anticuerpos a Brucella en el zorro; funcionó tanto en sueros tratados con
BKS como en hemolizados, por lo que se puede decir
que es una buena técnica para ser aplicada en animales
silvestres en futuros estudios.
Cuando se trató de asociar prevalencia a la enfermedad
con el sexo de los animales muestreados no se
halló ninguna relación. Esto sugiere que la diseminación
de la brucelosis no necesita de la intervención de
un sexo más que del otro para ser efectiva. Sin embargo,
será necesario realizar muestreos de mayor tamaño
para confirmar estos datos preliminares.
CORRESPONDENCIA
LUMILA FUCHS
INTA Anguil, Ruta 5 km 580
6326 ANGUIL
La Pampa. Argentina
E-mail: lfuchs@anguil.inta.gov.ar
1. Pavlov P, Tchilev D, Mateev M, Milanov M. Recherches sur des réservoires de Brucella chez le pore vivant en liberté. Bull Off Int Epizoot 1960; 53 (1): 1511-26.
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Aceptado para su publicación el 8 de mayo de 2009