BIOLOGÍA REPRODUCTIVA
Biología reproductiva de tres especies simpátricas de Bignoniaceae en Argentina
Juan Pablo Torretta1,3 y María Carolina Cerino2,3
1 Cátedra de Botánica Agrícola, Facultad de Agronomía,
Universidad de Buenos Aires, Av. San Martín 4453,
C1417DSE, Buenos Aires, Argentina. torretta@agro.uba.ar
2 Cátedra de Botánica Sistemática Agronómica, Facultad
de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Litoral.
3 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y
Técnicas, Argentina.
Resumen: La biología reproductiva de Handroanthus heptaphyllus, Tabebuia nodosa y Fridericia dichotoma (Bignoniaceae) fue estudiada en la reserva El Bagual, Provincia de Formosa, Argentina, para describir aspectos de la biología floral, recompensas florales, sistemas reproductivos, polinizadores y visitantes florales. Los resultados obtenidos revelan que las tres especies estudiadas son autoincompatibles, no autógamas y dependientes de polinizadores (abejas de tamaño mediano a grande). La formación de frutos en flores tratadas con polinización cruzada manual fue superior a la de las flores no tratadas (control); mientras que las flores auto-polinizadas no formaron frutos. El éxito reproductivo relativo fue bajo en las tres especies. Tales éxitos reproductivos podrían deberse a un bajo servicio de polinización (limitación de polen/polinización), debido a altos niveles de geitonogamia.
Palabras clave: Bignoniaceae; Polinización; Sistema reproductivo; Argentina.
Summary: Reproductive biology of three sympatric Bignoniaceae in Argentina.The reproductive biology of Handroanthus heptaphyllus, Tabebuia nodosa y Fridericia dichotoma (Bignoniaceae) was studied in El Bagual natural reserve, Formosa Province, Argentina, to describe aspects of floral biology, floral rewards, reproductive system, pollinators, and floral visitors. The results show that species are self-incompatible, non-autogamous and pollinator-dependent (large to medium-sized bees). The fruit set in manually cross-pollinated flowers was higher than the in control flowers. Manually self-pollinated flowers did not set fruits in any of these species. Relative reproductive success was low in the three species. Such low reproductive success may be due to pollen or pollination limitation caused by high levels of geitonogamy.
Key words: Bignoniaceae; Pollination; Reproductive system; Argentina.
Introducción
Bignoniaceae es una familia de árboles, arbustos
y lianas presente en las regiones tropicales y
subtropicales del mundo, con menor representación
en regiones templadas (Olmstead et al., 2009).
Posee una distribución pantropical, pero se hallan
principalmente en los bosques tropicales del Nuevo
Mundo, realizando una menor contribución a los
bosques tropicales de África, Malasia y SE de Asia
(Fabris, 1979; Gentry, 1990; Olmstead et al., 2009).
En Argentina, la familia se encuentra representada
por aproximadamente 60 especies con una mayor
riqueza en las regiones del NO y NE argentino
(Arbo, 1999).
Numerosas especies de esta familia poseen gran
importancia desde un punto de vista ecológico,
económico y social. Algunas especies constituyen
árboles de gran porte muy requeridos por la industria
maderera; otras se cultivan con fines ornamentales;
una gran diversidad ha sido utilizada por pueblos
aborígenes como medicina, combustible, veneno y en
rituales religiosos; mientras que unas pocas son fuente
de alimento (Gentry 1992a; Demaio et al., 2002).
Entre las especies neotropicales y de regiones
templadas, la biología reproductiva exhibe una
apreciable diversidad, ya sea en el tipo de sistema
reproductivo como en patrones fenológicos (Gentry,
1974a,b) y tipos morfológicos florales (Gentry,
1974b). La mayoría de las especies presenta autoincompatibilidad y xenogamia obligada
(Stephenson & Thomas 1977; Bertin, 1982; Weber
& Vogel, 1986; Gentry, 1990; James & Knox,
1993; Gibbs & Bianchi, 1993, 1999; Bittencourt
Jr. et al., 2003; Bittencourt Jr. & Semir, 2004;
Rodrigues Correia et al., 2005; Motta Maués et al.,
2008; Gandolphi & Bittencourt Jr., 2010); aunque
en menor frecuencia fue mencionada la presencia
de cierto grado de autocompatibilidad (Gobatto-
Rodriguez & Stort, 1992; Dutra & Machado,
2001). En numerosas especies con polinización
cruzada fue comprobada la existencia de algún
mecanismo de autoincompatibilidad de acción
retrasada (LSI, late-acting self-incompatibility)
(Bittencourt Jr. et al., 2003). Sin embargo, el (o los)
mecanismo/s involucrado/s en este tipo de LSI aún
no están esclarecidos (Gibbs & Bianchi, 1999).
Gentry (1990) afirma que una combinación de
adaptaciones estructurales y comportamentales
que permitan un uso diferencial de recursos,
explica la existencia de varias especies simpátricas
en aislamiento reproductivo. La ocurrencia de
simpatría entre muchas de las especies neotropicales
de Bignoniaceae, los pocos casos citados de
hibridación natural interespecífica, y la posibilidad
de producir híbridos (inclusive intergenéricos)
(Gentry, 1990), refuerza la hipótesis referida a
que la diversidad reproductiva existente entre
las Bignoniaceae permite un uso diferencial de
polinizadores y la consecuente coexistencia de las
mismas.
El norte de Argentina presenta formaciones
vegetales en las que conviven varias especies
de Bignoniaceae, lo cual constituye el escenario
propicio para poner a prueba las generalizaciones
sobre aislamiento reproductivo generadas en otras
latitudes, y avanzar en el conocimiento sobre
el comportamiento reproductivo de importantes
especies arbóreas de nuestro país. Una muestra de
dicha circunstancia se halla en la Reserva El Bagual,
ubicada al sudeste de la provincia de Formosa,
donde conviven Handroanthus heptaphyllus (Vell.)
Mattos, Tabebuia nodosa (Griseb.) Griseb, y
Fridericia dichotoma (Jacq.) L.G. Lohmann. Los
objetivos del presente trabajo son: 1) estudiar el
desarrollo floral y las recompensas ofrecidas a
los visitantes florales, 2) identificar sus visitantes
florales y polinizadores, y 3) determinar el sistema
reproductivo y medir el éxito reproductivo materno
de las tres especies.
Materiales y Métodos
Sitio de estudio
El trabajo de campo fue realizado entre Agosto
de 2001 y Octubre de 2002 en la Reserva El Bagual,
ubicada en el extremo sudeste del Departamento San
Francisco de Laishi (S 26º 10´ 53´´, W 58º 56´39´´),
Provincia de Formosa, Argentina. La misma está
incluida dentro de la región fitogeográfica ‘Chaco
Oriental' (Cabrera 1971), y la vegetación natural
incluye, básicamente, sabanas con árboles o
arbustos que cubren grandes extensiones y dos tipos
de bosques: ribereños asociados a cursos de ríos y
riachos, y bosques en isletas dispuestos en parches
sobre una matriz de pastizales (Di Giacomo, 2001;
Maturo et al., 2005). Las visitas al sitio de estudio
fueron realizadas en tres oportunidades: agosto y
septiembre de 2001, y octubre de 2002.
Especies estudiadas
Handroanthus heptaphyllus (Vell.) Mattos
(Tecomeae), (=Tabebuia heptaphylla (Vell.)
Toledo), conocida vulgarmente como "lapacho
morado", "lapacho negro" o "ipé", es un
árbol de hasta 25-(30) m de altura, de hojas
palmaticompuestas, 5-(7)-folioladas, de borde
aserrado. Especie caducifolia, cuya floración ocurre
cuando el árbol se encuentra aun sin hojas. El cáliz
esta formado por 5 sépalos fusionados. La corola
5-lobulada, de unos 5-6,5 cm de longitud, es rosadomagenta.
La inflorescencia es una panícula terminal
con gran número de flores. Posee cuatro estambres
didínamos con anteras divaricadas y filamentos
fusionados con la base de la corola. Presenta un
disco nectarífero que rodea la base del ovario. El
fruto es una cápsula cilíndrica, alargada, de hasta
unos 40 cm de largo y 1-1,5 cm de diámetro, que
libera numerosas semillas bialadas (Fabris, 1979;
Gentry, 1992b).
Tabebuia nodosa (Griseb.) Griseb. (Tecomeae),
conocida como "palo cruz", "uiñaj" o "Martin
Gil", es un árbol de 2-10-(15) metros de altura.
Las hojas son simples, caducas y cortamente
pecioladas. Posee un cáliz acampanado y una
corola infundibuliforme amarilla de 2,5-4,5 cm de
longitud con guías de néctar rojizas. El androceo
esta formado por cuatro estambres didínamos con
anteras divaricadas, y filamentos fusionados a
la corola. El disco nectarífero es similar al de la
especie anterior. La inflorescencia esta formada por una única flor o por grupos de 2-3 flores. La cápsula
es lineal, de hasta unos 15 cm de longitud y 1 cm de
diámetro, y libera semillas bialadas (Fabris, 1993;
Gentry, 1992b; López et al., 1987).
Fridericia dichotoma (Jacq.) L.G. Lohmann
(Bignonieae), (=Arrabidaea corallina (Jacq.)
Sandwith), conocida como "dama del monte",
a diferencia de las especies anteriores es una
liana. Las hojas son 2-3-folioladas con foliolos
ovados a elípticos y zarcillos simples. El cáliz es
acampanado con dientes muy cortos. La corola
es rosado-lila, con el interior del tubo blanco, de
4-6 cm de longitud. Los estambres son didínamos
con anteras divaricadas, y los filamentos están
soldados a la base de la corola. El ovario es
cilíndrico y escamoso, el estilo es mas largo que
los estambres y remata en un estigma bilamelado.
Las inflorescencias son multifloras y generalmente
axilares. El fruto es una cápsula de unos 20-30 cm
de longitud y 1,5-2 cm de ancho, que libera semillas
aladas (Fabris, 1993).
Material de referencia de las tres especies
se encuentra depositado en el Herbario "Gaspar
Xuarez" de la Facultad de Agronomía de la
Universidad de Buenos Aires (Handroanthus
heptaphyllus BAA24730-3; Tabebuia nodosa BAA
24727-9 y Fridericia dichotoma BAA 24724-6).
Fenología de floración
Las tres especies focales florecen en el área de
estudio hacia finales del invierno y principios de
la primavera. Handroanthus heptaphyllus florece
entre fines de agosto y principios de octubre con
el pico de floración durante el mes de septiembre.
El período de floración de cada individuo es
aproximadamente un mes. Algunos individuos
pueden presentar un segundo y más pequeño pico
de floración hacia comienzos del verano (Torretta,
2004). Tabebuia nodosa, tiene una floración más
prolongada y florece desde agosto-septiembre
hasta el mes de febrero, con un pico en la época
primaveral (octubre-noviembre), y los períodos
de floración de cada individuo son cortos y con
bajo número de flores, con varios períodos de
floración cada individuos (Torretta, 2004). Existe
una creencia popular que esta especie florece
prediciendo el comienzo de las lluvias (Gentry,
1992b). Fridericia dichotoma, exhibe un período
de floración entre finales de septiembre y comienzo
de noviembre con un pico de máxima floración en
octubre. En el área de estudio, H. heptaphyllus y F.
dichotoma solapan parcialmente en el período de
floración, mientras que T. nodosa coflorece con las
otras especies, prácticamente durante la floración
completa (Torretta, 2004).
Biología floral
Desarrollo floral. La morfología y longevidad
floral fueron determinadas en base a 50 botones
florales que se hallaban próximos a la antesis.
Estos fueron marcados en 3, 8 y 5 individuos
de H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma,
respectivamente, y revisados dos veces por día
hasta la senescencia floral.
Néctar. Las mediciones de volumen y
concentración de néctar fueron realizadas sobre
flores sin visitas que se encontraban encerradas
con bolsas de tela. El néctar fue obtenido mediante
jeringas de 10 microlitros, y su concentración
determinada con refractómetros manuales
[n=40 flores (5 individuos), 28 (4) y 49 (5)
para H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma,
respectivamente]. Ambas variables fueron
comparadas entre especies y entre individuos de
cada especie. Como los datos no cumplieron con el
supuesto de normalidad se analizaron mediante una
prueba no paramétrica de Kruskall-Wallis.
Polen. La producción de granos de polen por
antera y por flor fue determinada en base a un total
de 15, 6 y 8 botones florales próximos a la antesis
colectados en 3 individuos de H. heptaphyllus (5 flores por individuo), T. nodosa (2 flores por
individuo) y F. dichotoma (3 flores en dos individuos
y 2 flor en el tercer individuo). El polen obtenido de
las anteras fue suspendido en un volumen conocido
de agua, al cual fueron agregadas esporas foráneas
(pastillas de Lycopodium). Posteriormente, esta
suspensión fue centrifugada a 15 min a 3500 rpm,
y el sedimento obtenido fue montado en gelatina
coloreada con safranina. Bajo microscopio óptico
se realizó el recuento de las esporas y los granos
de polen presentes en una alícuota de dicho
sedimento (Stockmarr, 1970). El número de granos
de polen por flor fue calculado multiplicando el
valor obtenido en el paso anterior por el número de
anteras de la flor. El número de granos de polen por
flor se comparó entre grupos mediante una prueba
no paramétrica por rangos de Kruskall-Wallis.
Para cada especie fueron comparados los valores
medianos entre grupos mediantes pruebas de LSD (least significant diference) de comparaciones
múltiples.
Cargas polínicas en los estigmas de las especies
focales
Para determinar si otras especies de la comunidad
cuyas floraciones se superponen total o parcialmente
con las de H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma,
o comparten polinizadores con ellas, se analizó la
carga polínica hallada sobre los estigmas de cada
especie focal. Para ello se colectaron gineceos de 15
flores por individuo expuestas a polinización libre
seleccionados al azar en tres individuos de cada
especie. Posteriormente la superficie estigmática
fue macerada durante 24h en una solución de
NaOH 20% en cámara húmeda, y montada en un
portaobjetos con gelatina-glicerina coloreada con
safranina. Finalmente, el análisis de la procedencia
de los granos de polen fue realizado en base a
la cantidad de granos de polen presentes y a su
pertenencia taxonómica, comparando los mismos
con una colección de referencia del Laboratorio
de Paleobotánica y Palinología, de la Facultad de
Ciencias Exactas y Naturales (UBA). El número de
granos de polen sobre los estigmas fue comparado
con el número de óvulos para cada una de las
especies mediante la prueba no paramétrica de Mann-
Whitney, para muestras independientes. Por otro
lado, el número de granos de polen coespecíficos y
heteroespecíficos en los estigmas de cada especie
fueron comparados con la prueba de Wilcoxon para
muestras dependientes o pareadas.
Polinizadores y visitantes florales
Fueron considerados "polinizadores" aquellos
visitantes florales que realizaron visitas legítimas,
es decir, que lograban el contacto con los órganos
reproductivos de la flor. La identidad de los visitantes
florales pudo obtenerse por observaciones directas y
captura de los animales que visitaban las flores de las
tres especies. Los insectos fueron capturados entre las
7:30 y 19:00 h, mediante redes entomológicas. Las
especies de aves fueron identificadas mediante el uso
de binoculares, y los picaflores en particular fueron
capturaron con redes de niebla (Avinet Inc. UELB/27,
Japón). Debido a que estas aves se movían entre
las flores más altas de árboles de H. heptaphyllus, a
fin de atraer individuos, fueron cortadas ramas con
varias inflorescencias de flores abiertas y dispuestas
en el suelo a modo de arbusto entre las 8:30 y 14:30h,
colocándose en sus inmediaciones las redes de niebla.
La mayoría de los insectos capturados fueron
determinados al menor nivel taxonómico posible,
en algunos casos con ayuda de especialista (Ver
Agradecimientos), y aquellos a los que no se los
pudo identificar fueron asignados a morfo-especies.
Los insectos capturados se encuentran depositados
en la Colección Entomológica de la Cátedra de
Botánica Agrícola de la Facultad de Agronomía de la
Universidad de Buenos Aires (FAUBA).
Carga polínica de los visitantes florales
Para el estudio de la carga polínica adherida al
cuerpo de los visitantes, el cuerpo de los insectos
(superficie dorsal), y la frente de los picaflores se
frotaron con trozos pequeños de gelatina-glicerina
coloreada con safranina. Con estas muestras se
elaboraron preparados que fueron examinados con
microscopio (Olympus BH2) para determinar la
pureza de la carga polínica. El polen hallado sobre
los visitantes florales fue comparado con la colección
polínica de referencia.
Sistema reproductivo
Para estudiar el sistema reproductivo de cada
especie, se marcaron 5 inflorescencias de número
conocido de flores en 6 individuos de H. hepatphyllus,
7 individuos de T. nodosa y 9 individuos de F.
dichotoma, cada una de las cuales fue asignada al
azar a cada uno de los siguientes tratamientos: (1)
Autopolinización espontánea: la inflorescencia fue
encerrada con una bolsa de tela impidiendo así el
flujo de polen exógeno, sin realizar tratamientos
de polinización; (2) Autopolinización manual
(autogamia y geitonogamia): la inflorescencia fue
encerrada con una bolsa de tela y a medida que las
flores alcanzaban la fase femenina, fueron polinizadas
con su propio polen o con polen de otra flor de la
misma planta, dependiendo de la disponibilidad de
polen; (3) Polinización cruzada manual (xenogamia):
la inflorescencia fue encerrada con una bolsa de
tela y a medida que las flores alcanzaban la fase
femenina, fueron polinizadas con polen recién
cosechado de flores recientemente abiertas de otros
individuos coespecíficos distantes; (4) Anemofilia:
la inflorescencia fue encerrada con una bolsa de
malla de 1mm, excluyendo a los visitantes florales y
permitiendo el pasaje de polen aerotransportado; (5)
Polinización libre (control): la inflorescencia marcada
no fue encerrada para permitir que los visitantes y el polen aerotransportado pudieran acceder libremente
a las flores. Al inicio de la experiencia fueron
contabilizadas las flores en cada inflorescencia.
Al finalizar la experiencia se cosecharon los frutos
formados en cada tratamiento. En el caso de T. nodosa, debido a la baja disponibilidad de flores
y al conocimiento de que se trata de una especie
auto-incompatible (Gibbs & Bianchi, 1999), no se
realizaron las pruebas de autopolinización espontánea
y manual. Para evaluar el efecto de los tratamientos de
polinización sobre la proporción de frutos formados
se realizó un análisis jerárquico log-lineal. Todos
los análisis fueron evaluados por el cociente de
verosimilitud del estadístico Chi cuadrado: términos
específicos de interacción y los efectos principales
fueron evaluados a partir de pruebas parciales de
asociación (Agresti, 2002).
Éxito reproductivo materno
El éxito reproductivo materno fue determinado a
partir de la proporción de flores que produjeron frutos
maduros (fruit set), y de óvulos que se transformaron
en semillas (seed set). La proporción fruto/flor
resultó directamente del tratamiento ‘Polinización
libre' utilizado para definir sistema reproductivo. La
proporción semilla/óvulo fue establecida relacionando
el número medio de óvulos por flor (fueron contados
en 15 flores de tres individuos para H. heptaphyllus,
6 flores de tres individuos para T. nodosa y 8 flores
de tres individuos para F. dichotoma) y el número
medio de semillas viables por fruto (fueron utilizados
20 frutos cosechados al azar de cuatro individuos
de cada especie). Con estos valores fue calculado
el índice de éxito reproductivo materno relativo
(RRS=Relative Reproductive Success) (Dafni 1992),
según la fórmula RRS = (número de frutos/número de
flores) x (número de semillas/número de óvulos). El
valor obtenido se encuentra entre 0 y 1. Los valores
cercanos a 1 indican un gran éxito reproductivo (1
implica la transformación en semillas viables de
todos los óvulos de la planta), mientras que valores
cercanos a 0 indican lo contrario (0 implica que la
planta no fue capaz de formar alguna semilla viable).
Resultados
Biología floral
La antesis de las tres especies sigue un curso
común. Sin embargo, se observaron leves diferencias
interespecíficas que se detallan luego de la
descripción general. El proceso de desarrollo floral
comprendió las siguientes etapas:
Apertura floral: las flores prontas a abrirse se
encuentran en posición horizontal o inclinada hasta
45º bajo la horizontal, presentando en esta etapa
secreción de néctar. La antesis comienza con la
expansión de los lóbulos de la corola. Antes de que
la misma se complete, el estilo comienza a alargarse
hasta superar a los estambres más largos. Fase masculina: una vez que los lóbulos de la
corola se encuentran completamente expandidos
se produce la dehiscencia de las anteras (que es
longitudinal e introrsa), primero de los estambres
mas largos y luego de los mas cortos. Continúa
observándose néctar en el disco nectarífero, y
el polen presentado sobre las anteras puede ser
removido por los visitantes florales.
Fase femenina: el estilo alcanza su máxima
longitud, quedando a 1-2 mm por encima de las
anteras mas externas, es decir al nivel de la garganta
floral. El estigma bilamelado se abre exponiendo la
superficie estigmática (que es blanca al principio y
luego se va oscureciendo desde el ápice hacia la base
de las laminillas, a medida que pierde receptividad)
hacia el exterior de la flor. En flores no visitadas o
poco visitadas durante la fase masculina, las anteras
pueden presentar polen aún durante esta fase, aunque
no están tan expuestas a los polinizadores como en la
fase masculina. El disco continúa presentando néctar. Senescencia: cuando se completa la antesis, la
corola cae junto a los estambres, quedando el gineceo
y el cáliz sobre la planta. En las flores polinizadas el
estilo perdura mientras los frutos en desarrollo son
pequeños, y luego abscinde, mientras que el cáliz
persiste en la mayoría de los frutos maduros. En las
flores no polinizadas cáliz y gineceo caen a los pocos
días.
A continuación se detalla la biología floral y las
variantes observadas en cada una de las especies
vegetales estudiadas. Handroanthus heptaphyllus: las flores son
ligeramente fragantes. La corola es rosado-magenta,
con una mancha amarilla en la garganta y guías
de néctar rojas que van desapareciendo a medida
que la flor envejece. La pared del tubo floral es
relativamente gruesa, lo cual otorga firmeza a la flor.
La longevidad de las flores es de 1 día. La mayoría
de ellas comienza a abrirse al amanecer (7:00-7:30h).
La presentación del polen comienza de manera inmediata: a las 8:00 lo hacen los estambres más
largos y alrededor de las 10:00 todas las anteras están
dehiscentes. El polen es progresivamente removido
por los visitantes, pero en flores no visitadas puede
permanecer sobre las anteras hasta el fin de la
antesis. Las flores entran en fase femenina hacia el
mediodía (12:30-13:00) y permanecen abiertas hasta
las ultimas horas de la tarde (19:30-20:00) tras lo
cual la corola y los estambres entran en senescencia.
Muy pocas se abren luego del mediodía y en caso
de hacerlo, generalmente entran en fase masculina a
la mañana siguiente. Las flores senescentes pierden
primero coloración, luego turgencia y al segundo
o tercer día de comenzada la antesis caen corola
y estambres. En esta etapa las flores no reciben
ninguna clase de visita.
Tabebuia nodosa: las flores prácticamente
carecen de perfume perceptible por seres humanos.
La corola es amarilla con delicadas guías de néctar
rojizas que desaparecen hacia la senescencia. El
tubo floral presenta una compresión dorso-ventral
marcada. A diferencia de H. heptaphyllus, las
flores son de textura delicada y caen fácilmente
cuando son manipuladas. Las flores duran entre 1
a 2 días. La mayoría comienza a abrir al amanecer
(7:00-7:30), aunque algunas pueden hacerlo hasta
pasado el mediodía (13:30-14:00). La dehiscencia
de los estambres comienza entre las 7:30 y 8:00,
alcanzando la media mañana (aproximadamente
las 10:00) con las cuatro anteras ya abiertas. Como
en la especie anterior, la carga polínica sobre los
estambres solo disminuye si se producen visitas.
Los lóbulos del estigma se despliegan alrededor
de las 13:00-13:30 y la fase femenina dura hasta
el atardecer del día siguiente. En esta especie se
encontraron flores sin néctar. Fridericia dichotoma: las flores son ligeramente
fragantes. La corola es rosado-lila con garganta
blanca, sin guías de néctar y de textura firme similar
a la de las flores del H. heptaphyllus. Las flores
de esta especie duran 1 día. La antesis comienza
temprano (6:30-7:00). Las anteras de los estambres
largos comienzan a presentar polen alrededor de
las 8:00 y a las 10:00-10:30 todas las anteras se
encuentran dehiscentes. Hacia las 11:00-11:30 las
flores entran en fase femenina, permaneciendo en
la misma hasta el atardecer, momento en el cual
las flores pierden la coloración de la garganta y al
segundo o tercer día caen corola y estambres.
Recompensas florales
Néctar.
Las tres especies presentaron néctar como
recompensa principal. Sin embargo, se observaron
diferencias en los valores medianos de volumen y
concentración ofrecidos por cada especie (Tabla
1, H=42,018; P=0,00001; H=57,865; P=0,00001,
respectivamente). Ambas variables presentaron
mayores valores en H. heptaphyllus y F. dichotoma que en T. nodosa.
Tabla 1. Volumen y concentración de néctar floral, número de granos de polen y óvulos por flor
(expresados como valores medios ± desvío estándar), de tres especies de Bignoniaceae de la reserva
El Bagual, Formosa, Argentina. Los valores entre paréntesis indican el número de flores tratadas/número
de individuos. s.d. sin datos. Valores acompañados por distintas letras indican diferencias significativas
(P<0,05, LSD de comparaciones múltipes).
Entre los individuos de H. heptaphyllus no se
observaron diferencias significativas medianas en
el volumen y la concentración del néctar (H=0,201; P=0,995 y H=3,609; P=0,462, para volumen y
concentración, respectivamente). Mientras que en T. nodosa y en F. dichotoma las diferencias entre
individuos fueron significativas para ambas variables
(H=9,138; P=0,0275 y H=9,979; P=0,0188,
volumen y concentración en T. nodosa; H=18,607; P=0,0009 y H=19,491; P=0,0006, volumen y
concentración en F. dichotoma, respectivamente).
Polen. El número de granos de polen producido
por las tres especies fue elevado (Tabla 1), y las
cantidades medianas fueron significativamente
diferentes entre especies (H=23.317; P=0,00001).
Cargas polínicas en los estigmas
En flores expuestas a los polinizadores, fueron
hallados un promedio (± desvío estándar) de
564,2±344,8; 131,8±93,1 y 176,0±225,6 granos de
polen en los estigmas de H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma, respectivamente. El número medio
de granos de polen fue superior al número medio
de óvulos en las tres especies (por factores de 2,6
x, 1,2 x y 6,3 x, para H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma, respectivamente). Sin embargo, las
diferencias entre el número de granos de polen en
estigmas y el número de óvulos fueron significativas
sólo para H. heptaphyllus y F. dichotoma (U=21,0; P=0,00025 y U=39,0; P=0,021, respectivamente).
Las cargas polínicas encontradas en los estigmas
estuvieron dominadas por granos coespecíficos,
cuyo número fue significativamente superior al
de granos heteroespecíficos en cada una de las
tres especies (Wilcoxon: T<0,00; P=0,000983; T<0,00; P=0,001475 y T<0,00; P=0,000983,
para H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma,
respectivamente). Una elevada proporción de
los individuos examinados presentó cargas
coespecíficas puras: en H. heptaphyllus todos los
estigmas revisados presentaron mas de un 99% de
polen coespecífico; en T. nodosa, el 85% de los
estigmas presentó un 100% de polen propio (y más
del 75% de polen propio en el 15% de estigmas
restantes); finalmente, en F. dichotoma en el 80%
de los estigmas fue hallado el 80% de polen puro,
mientras el mismo representó más de 70% en el
20% de estigmas restante.
Polinizadores y visitantes florales
Los visitantes florales más abundantes sobre
las tres especies de bignoniáceas pertenecieron
al Orden Hymenoptera (70% de los visitantes
florales). Otros visitantes florales fueron individuos
de Diptera, Lepidoptera y Coleoptera (Tabla 2) y
en las tres especies se observaron dos especies de
picaflores e individuos de otras familias de aves.
Tabla 2. Especies de insectos capturados en flores de tres especies de Bignoniaceae de la reserva El
Bagual, Formosa, Argentina.
Los himenópteros más abundantes fueron abejas
que pertenecían a las familias Apidae, Megachilidae
y Halictidae. También, se capturaron avispas
(Vespidae y Scoliidae), y hormigas (Formicidae).
El número de polinizadores compartidos fue bajo.
Solo la ubicua Apis mellifera fue observada en las
tres especies estudiadas. El número de insectos
visitantes florales fue variable entre las especies
vegetales, observándose la mayor riqueza en H. heptaphyllus (16 especies de visitantes florales),
seguida por T. nodosa (12 especies) y F. dichotoma (10 especies) (Tabla 2).
Polinizadores y otros visitantes florales
de Handroanthus heptaphyllus: las especies de
himenópteros identificadas como polinizadoras de H. heptaphyllus fueron Centris nigriventris, C. tarsata, Mesoplia rufipes, Tetragonisca angustula, A. mellifera, Megachile sp. 1 y sp. 2, y Xylocopa
macrops.
Entre los mismos se observaron variaciones
respecto al número de granos de polen transportados
por cada uno, la parte del cuerpo en que los
acarreaban, y el comportamiento de los individuos
para llegar hasta la recompensa. El número de granos
de polen transportado por estas especies fue elevado,
hallándose en todas (excepto Xylocopa nigrocincta)
entre 800 y más de 1000 unidades por individuo
(Tabla 3). Centris nigriventris, C. tarsata, M. rufipes y X. macrops transportaban el polen sobre el tórax; Megachile spp., A. mellifera y T. angustula lo hacían
principalmente sobre escopas y/o corbículas (y en
menor cantidad sobre el tórax). Las cargas polínicas
de los individuos capturados sobre las flores de esta
especie fueron mayormente puras.
Tabla 3. Cargas polínicas de algunos individuos de las especies de insectos capturadas en las flores de
tres especies de Bignoniaceae de la reserva El Bagual, Formosa, Argentina.
Las abejas Centris spp., Megachile spp. y M.
rufipes al arribar a las flores aterrizaban en la
plataforma formada por los lóbulos inferiores de la
corola, y se introducían caminando en el tubo floral,
hasta llegar al final del mismo donde libaban el néctar.
Debido a que el diámetro interno del tubo floral es
similar al tamaño de estos insectos, al ingresar a la flor
tocaban primero el estigma y luego las anteras con el
dorso de su tórax.
Entre las aves fueron observadas dos especies
de picaflores Hylocharis chrysura y Chlorostilbon
aureoventris realizando pocas visitas legítimas,
durante las cuales se acercaban de frente a la flor e
introducían el pico por la garganta floral, tocando
con la frente y el pico las anteras y estigmas. Dos
de los tres individuos capturados, llevaban pocos
granos de polen de H. heptaphyllus en las plumas
de la frente. Estas especies de picaflores defendían
su parche floral de otros picaflores, de otras aves
e incluso de grandes abejorros como Xylocopa
nigrocincta y Bombus morio.
Diversas especies de visitantes florales no
transportaban polen o sus cargas polínicas eran
reducidas, entre ellos se encuentran Ceratina sp., Augochlora sp., y Polybia sp., Copestylum sexmaculatum, Sarcophagidae sp 1, y Tephritidae sp
1 y Phoebis sennae. Muchas flores de H. heptaphyllus eran consumidas durante la antesis por especies de
aves como Ortallis canicollis (Cracidae), Amazona
aestiva y Pyrrhura frontales (Psittacidae), e incluso,
por monos Alouatta caraya (Cebidae).
También fueron comunes aves insectívoras que
recorrían las flores en busca de alimento, como el
fueguero (Piranga flava), el celestino (Thraupis
sayaca), el juan chiviro (Cychlaris gujanensis) y el
benteveo (Pitangus sulphuratus). Durante las visitas,
estos pájaros recorrían inflorescencias buscando
insectos dentro de las flores o en sus proximidades.
Polinizadores y otros visitantes florales de Tabebuia nodosa: los individuos sobre los que fue
observada una gran carga polínica (entre 150 y 600
granos de polen) pertenecieron a Ceratina sp., y Palpada pusilla (Tabla 3). Entre los visitantes florales
capturados cuyas cargas polínicas eran pequeñas se
encuentran individuos pertenecientes a Coleoptera,
Formicidae, y Díptera (Tabla 3).
Al igual que en
el caso de H. heptaphyllus, los grandes abejorros
exceden el diámetro floral de esta especie, por lo
cual el consumo de néctar fue a través de orificios
en la corola. Las especies de picaflores H. chrysura y C. aureoventris realizaron visitas esporádicas,
durante las cuales libaban en todas o casi todas las
flores disponibles de manera rápida. Sin embargo, no
pudo observarse si los individuos de estas especies
transportaban granos de polen.
Polinizadores y otros visitantes florales de Fridericia dichotoma: todos los individuos de C.
tricolor, Campsomeris sp., Megachile spp. y A.
mellifera fueron capturados llevando a cabo visitas
legítimas, y los mismos transportaban elevadas
cargas polínicas (Tabla 3).
Los himenópteros nativos
realizaban visitas muy rápidas, durante las cuales
llegaban volando a gran velocidad, se posaban en los
lóbulos inferiores de la corola, se introducían en el
tubo, y allí permanecían pocos segundos para luego
retirarse. La exótica A. mellifera, por el contrario,
se acercaba lentamente, sobrevolaba las flores y se
introducía en varias flores de manera secuencial,
pudiendo prolongarse su estadía dentro del tubo
por 20-30 segundos. Si bien las cargas polínicas de
las abejas silvestres y domésticas no eran puras, el
mayor porcentaje de granos de polen correspondía a F. dichotoma (Tabla 3).
Esta especie también fue visitada por los picaflores H. chrysura y C. aureoventris, quienes concurrían
solamente a individuos del dosel del bosque y no
a las plantas que se encontraban en la periferia del bosque. Durante sus visitas, estas aves recorrían
numerosas flores de cada inflorescencia, luego se
posaban en perchas, defendían el parche floral y
volvían a visitar flores de la misma inflorescencia o
de otras cercanas. Visitantes florales ladrones de néctar Fueron observados numerosos individuos X. nigrocincta comportándose como ladrones de
néctar en H. heptaphyllus y F. dichotoma. Como
consecuencia de un tamaño corporal que no permite el ingreso a las flores, los mismos extraían el néctar
a través de perforaciones en el tubo floral realizadas
previamente por aves o, realizados por ellos por
medio de sus fuertes galeas. En H. heptaphyllus,
además fueron identificadas como ladrones de
néctar varias especies de aves: los picaflores H. chrysura y C. aureoventris, además de realizar
visitas legítimas, fueron observados en un elevado
número de flores y en la mayoría de las plantas
florecidas libando néctar sin realizar contacto con
los órganos fértiles de las flores y los ictéridos Icterus cayanenesis, Cacicus chrysopterus y C. solitarius, que para libar el néctar, cortaban la base
de la corola generando un daño importante. En F.
dichotoma, además del mencionado abejorro, otros
visitantes florales que no transportaban granos de
polen y fueron observados consumiendo néctar,
fueron Camponotus sp. 1, Campsomeris sp. y
Sarcophagidae. sp 4 (Tabla 3).
Sistema reproductivo
Las tres especies en estudio produjeron mayor
proporción de frutos formados bajo el tratamiento
de polinización cruzada manual (Tabla 4), siendo
las diferencias entre éste y cualquiera de los demás
tratamientos altamente significativas (análisis loglineal;
χ2=1082,8; χ2=2378,5 y χ2=101,7, para H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma,
respectivamente, P<0,001 para las tres especies).
Sin embargo, la proporción de frutos formados entre
los demás tratamientos no difirió significativamente
para ninguna de las especies (análisis log-lineal;
χ2=5,350, P=0,147; χ2=2,741, P=0,098; χ2=0,554 P=0,907, para H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma, respectivamente). Si bien la polinización
cruzada manual incrementó la tasa de fructificación,
no influyó sobre la tasa de formación de semillas.
La diferencia en el número de semillas por fruto
entre frutos formados por polinización libre y
frutos logrados por polinización cruzada manual
(Tabla 4), no fue significativa en ninguna de las
tres especies (pruebas de Mann-Whitney; U=475,0; U=206,0 y U=318,0; para H. heptaphyllus, T. nodosa y A. corallina, respectivamente; P>0,05 en
los tres casos).
Tabla 4. Número (expresados como valores medios ± desvío estándar) y rango de semillas por fruto
obtenidos por tratamiento de polinización cruzada manual y polinización libre. Resultados de los cinco
tratamientos realizados para estudiar el sistema reproductivo (expresados como porcentaje de flores
convertidas en frutos). Relación semilla/óvulo (seed set) y fruto/flor (fruit set) y éxito reproductivo
materno de tres especies de Bignoniaceae de la reserva El Bagual, Formosa, Argentina.
Éxito reproductivo materno
El éxito reproductivo materno observado fue
muy bajo en las tres especies (Tabla 4). Los valores
del índice de éxito reproductivo materno calculado
fueron cercanos a 0 (RRS=0,0017-0,0563%),
indicando que de la totalidad de óvulos disponibles
sólo una fracción muy pequeña logró formar
semillas, debido principalmente a una bajo relación
fruto/flor (fruit set, Tabla 4).
Discusión
El presente estudio aporta información acerca de la biología reproductiva de ejemplares leñosos característicos de las formaciones boscosas del NE de Argentina. Las poblaciones de Handroanthus heptaphyllus y Fridericia dichotoma son estudiadas por primera vez, mientras que en el caso de Tabebuia nodosa, el conocimiento sobre aspectos reproductivos (Gibbs & Bianchi, 1999) se ve complementado en los aspectos de elenco de polinizadores, naturaleza de las recompensas florales, y limitación polínica del éxito reproductivo.
Biología floral
En las flores de las tres especies fueron observados
dos sistemas de separación en la presentación del
polen y la receptividad estigmática: dicogamia
incompleta (protandria) y herkogamia homomórfica
(Lloyd & Webb, 1986).
En estas especies, como
ocurre en el resto de las Bignoniaceae (Gentry,
1974b, Stephenson 1982), fue observado el cierre
de lóbulos estigmáticos luego de polinizarlos
manualmente (Torretta, obs. pers.). Se considera
que este mecanismo refuerza la hercogamia
posicional (Webb & Lloyd, 1986).
Las flores de las especies estudiadas corresponden
a dos de los tipos morfológicos definidos por
Gentry (1974a,b). H. heptaphyllus y F. dichotoma presentan el tipo Anemopaegma, caracterizado
por el desarrollo de flores de tamaño mediano,
tubulares-campanuladas, de textura delicada o
firme y tubo ligeramente comprimido. Este tipo
morfológico es compartido por la mayoría de
las Bignoniaceae (Gentry, 1980), y en el clado
neotropical Bignonieae representa la condición
predominante (Alcantara & Lohmann 2010). Por
otro lado, las flores de T. nodosa se consideran de
un tipo intermedio entre los tipos Anemopaegma y Cydista, caracterizado por poseer flores medianas,
tubulares-infundibuliforme, de garganta mas
estrecha que el anterior, tubo dorso-ventralmente
comprimido, y textura usualmente delicada (Gentry, 1974b). Este tipo intermedio es característico de
varias especies de Tabebuia s.l. (Gentry, 1974b). Polinizadores y visitantes florales Gentry (1974b) comenta que las especies
con flores de tipo Anemopaegma son polinizadas
principalmente por abejas medianas a grandes.
A su vez, Frankie & Haber (1983) establecieron
que abejas del mismo tamaño son los principales
polinizadores de árboles con floración en masa
("mass flowering"). Ambas afirmaciones son
consistentes con lo observado en el presente trabajo,
ya que H. heptaphyllus y F. dichotoma tienen flores
del tipo Anemopaegma, y floración en masa, y
fueron visitadas principalmente por himenópteros
de tamaño corporal mediano (1-1.5 cm long).
El comportamiento de forrajeo de estos insectos
sugiere que son sus principales polinizadores. Sus
visitas fueron legítimas e involucraron a pocas
flores. Al ingresar a las flores, estos visitantes
contactan primero la superficie receptiva del
estigma con el dorso del tórax, y luego tocan los
estambres. Después de libar néctar en el fondo del
tubo de la corola, salen caminando hacia atrás y
contactan la porción no receptiva del estigma. Esta
secuencia promueve la transferencia de polen entre
flores y evita la autopolinización.
Estos resultados obtenidos respecto al gremio
de polinizadores coinciden con otros especies de
Bignoniaceae con flores de tipo Anemopaegma,
como Handroanthus guayacan (Seeman) Grose
(Bawa et al., 1985), H. ochraceus (Cham.)
Mattos y Tabebuia aurea (Silva Manso) Benth.
& Hook. (Barros, 2001), T. rosea (Bertol.) A.
DC. y Handroantus impetiginosus (Mart. ex DC.)
(Frankie et al., 1983), Arrabidaea conjugata (Vell.) Mart. (Rodrigues Correia et al., 2005), A.
brachypoda (DC.) Bor., A. triplinervia (Mart. ex
DC.) Baill. ex Bureau y Fridericia samydoides (Cham.) L.G. Lohmann (Yanagizawa & Maimoni-
Rodella, 2007).
La abeja doméstica no debería ser considerada
como polinizador eficiente debido a su tendencia
a visitar numerosas flores de una misma inflorescencia
y numerosas inflorescencias dentro de
un mismo individuo. Estas visitas secuenciales
en flores de un mismo individuo aumentan la
geitonogamia (Klinkhamer & de Jong, 1993),
generando deposición de polen propio en los
estigmas. En especies autoincompatibles, como las
aquí estudiadas, este fenómeno tiene dos efectos
negativos: 1) implica malgasto de polen, ya que el
polen propio no llevará a la formación de semillas;
e 2) interfiere con la recepción de polen de otros individuos, ya sea a través de la oclusión estigmática
o como consecuencia de interferencia fisiológica con
el crecimiento de polen compatible (Kay, 1987).
El papel de las aves en la polinización de estas
especies podría ser considerado de importancia
secundaria. Los colibríes e ictéridos libaron néctar
de gran cantidad de flores de H. heptaphyllus, pero la
mayoría de las veces lo hacían de manera ilegítima,
destruyendo muchas flores y permaneciendo un
tiempo prolongado en el mismo individuo. Este
último aspecto del comportamiento es similar al de
la abeja doméstica, y probablemente también genera
grandes niveles de geitonogamia. Los colibríes que
se observaron sobre las flores de T. nodosa y F. dichotoma mostraron el mismo comportamiento.
Las hormigas, aunque no son polinizadores,
merecen mención especial, debido a que
probablemente desempeñen un papel mutualístico
adicional. Muchas especies de Bignoniaceae, además
de poseer compuestos químicos como protección
primaria, tienen un sistema secundario de protección
frente a los herbívoros basado en el establecimiento
de mutualismo con hormigas (Gentry 1974b).
Recientemente, Gonzalez (2011) reporta domacios
y nectarios extraflorales en numerosas especies de
bignoniáceas argentinas.
Las especies que poseen floración en masa
estudiadas en Costa Rica por Frankie & Haber
(1983), exhiben variación intraespecífica en la tasa
de secreción de néctar. Esta estrategia convierte a
la recompensa en un recurso variable que obliga a
los visitantes florales a efectuar visitas a muchos
individuos de la población, promoviendo la
xenogamia. Una situación semejante fue observada
en F. dichotoma y T. nodosa, quienes presentaron
variación intraespecífica significativa en el volumen
y la concentración de néctar producido.
Otros fenómenos que pueden favorecer el
movimiento de los polinizadores entre individuos
son: (1) la interacción agresiva entre los polinizadores
(Frankie, 1975), y (2) la atracción de predadores de
polinizadores, principalmente, aves insectívoras
denominadas "anti-polinizadores" (Gentry 1978).
Respecto a esta última opción, las especies de
aves insectívoras halladas en H. heptaphyllus, bien
podrían actuar como anti-polinizadores.
Si bien en T. nodosa se capturaron varias especies
de visitantes florales, ninguna de ellas parece
constituir un polinizador principal de esta planta.
Los insectos capturados visitaban las flores, la
mayoría de las veces, de manera ilegítima, y cuando
lo hacían legítimamente recorrían varias flores del
mismo individuo generando un traspaso inefectivo
del polen propio. Gentry (1974b) menciona que las
especies cuyo patrón de floración es el denominado
"steady state modified" (pocas flores abiertas a la
vez, 1-2 días de longevidad floral, comienzo de la
antesis temprano a la mañana, fenología floral de
1-3 meses, con poca o ninguna sincronización entre
individuos), y que además presentan morfología
floral del tipo Cydista, son polinizadas por abejas que
siguen rutas de forrajeo establecidas o "trapliners",
sin embargo, no se capturaron abejas con este tipo de
comportamiento de forrajeo.
Sistema reproductivo
Los resultados obtenidos en las pruebas de
compatibilidad indican la existencia de xenogamia
obligada en las tres especies estudiadas. La
autoincompatibilidad observada en H. heptaphyllus,
difiere a lo observado por Bittencourt Jr. & Semir
(2005) para la misma especie (citada como Tabebuia
heptaphylla). Estos autores encontraron formación
de frutos a través de auto-polinización manual en un
individuo cultivado (de los tres estudiados).
Como se mencionó anteriormente, T. nodosa es una especie que posee autoincompatibilidad
de acción retrasada (LSI, late-acting selfincompatibility)
(Gibbs & Bianchi, 1999). En
especies con este tipo de sistema reproductivo, los
tubos polínicos propios crecen a través del estilo y
malgastan los óvulos ya que estos indefectiblemente
terminan por abortar, disminuyendo el éxito
reproductivo materno (Vaughton & Ramsey, 1995).
Esto se considera una fuerte presión selectiva contra
la floración en masa en especies auto-incompatibles
(de Jong et al., 1992). Se ha comprobado que
varias especies de la familia Bignoniaceae, y
especies de los géneros Fridericia, Handroanthus y Tabebuia, poseen este tipo de sistema reproductivo
(Gibbs & Bianchi, 1993; 1999; Amaral, 1992
en Gibbs & Bianchi, 1999; Bittencourt Jr. et al.,
2003). Si bien no hemos profundizado el estudio
en este aspecto, posiblemente, H. heptaphyllus y F. dichotoma posean el mismo mecanismo de
autoincompatibilidad (aunque ver Bittencourt Jr. &
Semir, 2005).
Éxito reproductivo materno
El éxito reproductivo materno disminuye cuando son pocas las flores que forman frutos y/o pocos
los óvulos que se transforman en semillas. Una
menor formación de frutos que de flores podría
explicarse por la limitación en la obtención de
algún recurso (Stephenson, 1981; Niesenbaum,
1999). Dos recursos limitantes son la limitación
polínica, (en sus componentes cuantitativos y
cualitativos), y la limitación por recursos (Vaughton
& Ramsey 1995). En este sentido, la limitación del
éxito reproductivo materno debido a la recepción
inadecuada de granos de polen (causada por una
limitación polínica cuanti- y/o cualitativa), parece
ser un fenómeno común en las plantas (Burd 1994,
Ashman et al. 2004).
En las tres especies estudiadas, el bajo éxito
reproductivo, fue consecuencia del déficit en la
formación de frutos a partir del número de flores
expuestas a los polinizadores, es decir, bajo fruit
set (entre 0,017 y 0,086). Este reducido éxito
reproductivo sería consecuencia de la baja calidad
del servicio de polinización. La causa de esto
puede hallarse en un bajo número de visitas de
polinizadores, y/o la prolongada permanencia de
inefectivos visitantes florales.
Las tres especies poseen un servicio de
polinización de baja calidad que determina que
pocas flores inicien frutos. Pero si hay formación de
fruto, entre el 55% y el 82%, de los óvulos forman
semillas (seed set). Las pruebas de adición de polen
sobre el estigma son una buena herramienta para
determinar la existencia de limitación polínica
(Vaughton & Ramsey 1995). El agregado manual de
polen de individuos coespecíficos aumentó el éxito
reproductivo materno, evidenciado en el aumento de
la tasa de formación de frutos entre uno y dos órdenes
de magnitud en H. heptaphyllus, T. nodosa y F. dichotoma (33,1x, 5,5x y 98,7x, respectivamente).
A su vez, no se observó un aumento en el número
de semillas por frutos formados por polinización
cruzada manual, al comparar con el control. Young
& Young (1992) señalan que los incrementos
en el éxito reproductivo materno asociados a un
incremento en la polinización, usualmente son
considerados como evidencia de limitación polínica
o de polinizadores. Nuestros resultados confirmarían
esta afirmación y consideran la disponibilidad de
polen (de buena calidad) como la variable limitante
del éxito reproductivo materno de las poblaciones
de estas tres especies de Bignoniaceae en el NE de
Argentina.
Agradecimientos
A Diego Medan y Alicia Basilio, quienes dirigieron este trabajo como parte de tesis de Licenciatura de JPT; a Alparamis S.A. por permitir trabajar en la Reserva "El Bagual"; a Alejandro Di Giacomo por la ayuda en la Reserva "El Bagual"; a Arturo Roig Alsina por la determinación de los visitantes florales, a Norberto Bartoloni por su ayuda con el análisis estadístico de los datos y a N. Montaldo por la colaboración en el trabajo con redes de niebla para la captura de los picaflores. La lectura crítica de dos revisores anónimos enriquecieron una versión preliminar del manuscrito. J.P.T. es miembro de CONICET, Argentina.
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Recibido el 30 de marzo de 2012,
aceptado el 29 de mayo
de 2012.