Abstract

BERLEMONT, Renaud et al. Nueva esterasa tolerante a los solventes orgánicos aislada por metagenómica: ideas sobre la clasificación de las esterasas/lipasas. Rev. argent. microbiol. [online]. 2013, vol.45, n.1, pp.3-12. ISSN 0325-7541.

Con el fin de aislar nuevas variantes de lipasas tolerantes a solventes organicos (OST), se construyo una libreria metagenomica a partir de ADN obtenido de una muestra de suelo de bosque templado. A traves de un monitoreo en dos etapas, basado en la deteccion de actividades, se aislo un clon con actividad lipolitica en presencia de solventes organicos. La secuenciacion del plasmido pRBest recuperado del clon positivo revelo la presencia de un gen codificante de una hipotetica lipasa/esterasa. La secuencia deducida de amino acidos (RBest1) contiene los motivos conservados de enzimas lipoliticas y esta relacionada con la lipasa OST previamente descrita de Lysinibacillus sphaericus 205y, que es la unica enzima procariota estudiada perteneciente al subgrupo 4.4 de a/ß hidrolasas (abH4.04). Estudios in vivo e in vitro sobre la especificidad de sustratos de RBest1, utilizando triacil-gliceroles o p-nitrofenil-esteres, respectivamente, revelaron que la enzima es altamente especifica para compuestos butiricos (C4), comportandose como una esterasa y no como una lipasa. La esterasa RBest1 fue purificada y caracterizada bioquimicamente. La actividad optima de esterasa fue observada a pH 6,5 y las temperaturas optimas fueron entre 38 y 45 °C. Se establecio que la actividad enzimatica, determinada por hidrolisis de p-nitrofenil esteres, es afectada en presencia de diferentes solventes organicos miscibles y no miscibles, y tambien sales. Notoriamente, RBest1 permanece significativamente activa a elevadas fuerzas ionicas. Estos hallazgos sugieren que RBest1 posee la capacidad de las enzimas OST de la adaptacion molecular en presencia de compuestos organicos, asi como la resistencia de las proteinas halofilas.

Keywords : Familia de lipasas sensibles a hormonas; Metagenomica funcional; Libreria metagenomica; abH4.04; Lysinibacillus sphaericus.

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