Introducción

La raza Texel fue creada hacia fines del siglo XIX en la isla Texel, al norte de Holanda, por medio de cruzamientos entre la raza Old Texel con Lincoln y Leicester Longwool e introducida en la Provincia de Buenos Aires desde Uruguay, en 1977.

El ovino es una especie con actividad reproductiva estacional (fotoperíodo decreciente) que se manifiesta en el otoño en latitudes lejanas al Ecuador. Por otro lado, las razas adaptadas a vivir en latitudes bajas, carecen de un “anestro estacional verdadero”. En este contexto, se observó que la estación del año y/o el foto-período decreciente afectan los parámetros reproductivos en razas como Texel, Suffolk, Karakul y Dorset ¹².

Durante el trayecto epididimario y la eyaculación, los espermatozoides entran en contacto con secreciones de las glándulas anexas (plasma seminal) donde adquieren motilidad progresiva y capacidad fertilizante ²⁶.

El plasma seminal presenta actividad antimicrobiana, neutraliza metabolitos espermáticos e interviene en la capacitación espermática ²⁷. En su composición se encuentran proteínas, enzimas, hormonas, iones, entre otras. Algunos autores han relacionado la actividad enzimática del plasma seminal con las características de calidad espermática del eyaculado ¹⁵.

La información existente sobre la actividad reproductiva anual de los carneros de la raza Texel, es limitada y en ocasiones difícil de interpretar, debido a las diversas metodologías que se han utilizado para su estudio. La hipótesis de trabajo fue que las características reproductivas de los carneros Texel varían según la estación del año, siendo el otoño (fotoperíodo decreciente) la estación con mejor aptitud reproductiva en la latitud estudiada.

Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de la estación del año sobre los siguientes parámetros reproductivos: circunferencia escrotal, peso y volumen testicular, capacidad de servicio, concentración plasmática de testosterona, características cualicuantitativas del semen fresco y concentraciones enzimáticas en el plasma seminal.

Material y métodos

Este trabajo se realizó en la EEA Balcarce del Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Provincia de Buenos Aires, Argentina (37°45’ latitud sur, 58°18’ longitud oeste, 130 msnm), desde el 21 de marzo de 2017 al 20 de marzo de 2018. Las estaciones del año consideradas fueron otoño (21/03-20/06), invierno (21/06-22/09), primavera (21/09-20/12) y verano (21/12-20/03).

Se utilizaron seis carneros Texel de dos años de edad (dos dientes permanentes) manejados en un sistema de pastoreo rotativo de avena (08.00 a 15.00 h) y suplementación a corral (15.00 a 07.00 h del día siguiente) con disponibilidad de agua ad libitum, seronegativos a Brucella ovis y Brucella melitensis.

Las variables físicas, peso vivo (PV) y circunferencia escrotal (CE) fueron determinadas una vez por mes. La CE fue medida con una cinta métrica metálica y cada testículo fue medido con un calibre electrónico, siendo la longitud el sentido más largo de la gónada, excluyendo cabeza y cola de epidídimo, y el ancho, la región ecuatorial de cada testículo.

Posteriormente se empleó la fórmula de peso testicular (PT=0,5533 x (L) x (A)2) y volumen testicular (VT=4/3 x (n) x (L/2) x (A/2)2), siendo L=longitud y A=ancho del testículo 3y los resultados finales se expresan para ambos testículos.

La prueba de capacidad de servicio (CS) se realizó dos veces por estación del año, en forma individual a corral con tres ovejas ovariectomizadas sujetas en bretes de salto durante 20 minutos y se registró el número de montas totales y cópulas completas ¹¹.

Se realizó extracción de sangre una vez por mes de la vena yugular, se centrifugó a 600g/10 min y el plasma fue separado y almacenado a -20°C hasta la determinación de la concentración de testosterona por medio de radioinmunoanálisis (RIA, kit comercial IM1119, Beckman Coulter Inc.USA).

Todas las muestras se procesaron con un coeficiente de variación intra-ensayo menor al 9% para concentraciones comprendidas entre 0,09 y 22,0 ng/ml y una sensibilidad estimada de 0,10 ng/ml.

El semen fue colectado con vagina artificial dos veces por semana durante las cuatro semanas centrales (quinta a octava semana) de cada estación y colocado en Baño María a 32°C para su evaluación. Las variables seminales evaluadas en semen fresco fueron: volumen, pH, motilidad de masa microscópica (0 a 5), concentración espermática (millones de espermatozoides/ ml), motilidad individual progresiva (%), vigor (0 a 5), relación vivos/muertos (%) y morfología espermática (% de anormalidades).

Luego de la evaluación, un total de 48 eyaculados (12 por estación) se procesaron para la obtención del plasma seminal según la técnica de doble centrifugación ². El plasma seminal se almacenó a -80°C, hasta el momento de determinar las concentraciones de glucosa y de las enzimas aspartato-aminotransferasa (AST), alanina-aminotransferasa (ALT), gamma-glutamil-transpeptidasa (GGT), fosfatasa alcalina (ALP) y lactato-deshidrogenasa (LDH).

Los procedimientos sobre los animales se realizaron cumpliendo con las normas requeridas por el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Experimentación (CICUAE, Protocolo N° 025) del INTA.

Para el análisis estadístico de las variables se ajustaron modelos lineales mixtos para medidas repetidas en el tiempo. Se consideraron los meses/estaciones del año como efecto fijo y el carnero, como efecto aleatorio y en algunos casos se incorporó una estructura autoregresiva entre los errores del mismo carnero dentro de una misma estación.

La heterogeneidad de varianza se modeló en las variables donde fue necesario, para seleccionar el modelo adecuado, a su vez se realizaron gráficos de diagnóstico de los residuales y pruebas de cociente de máxima verosimilitud restringida, para comparar modelos en cada variable. Se realizaron pruebas de Tukey para de­ terminar diferencias entre medias.

Se trabajó con un nivel de significación del 5% para considerar efectos significativos. Los análisis se efectuaron empleando el software R mediante la interfaz RStudio (Versión 0.99.903) 22, los gráficos se realizaron con el paquete lattice y los ajustes de modelos mixtos se realizaron con el paquete nlme.

Resultados

El PV promedio (±EE) anual de los animales fue de 60,4 (±0,8) kg, observándose el mayor valor (p<0,05) en el verano (70,6±2,3 kg).

Los promedios (±EE) anuales de la CE, el PT y el VT fueron 30,4 (±0,2) cm, 331,1 (±7,9) g y 313,4 (±7,5)

cm3, respectivamente. En las estaciones de verano y otoño se observaron los mayores valores (p<0,05) en los tres parámetros evaluados (Figura 1).

No se registraron diferencias (p>0,05) en el número promedio de cópulas completas entre estaciones (Figura 2). La eficiencia de servicio (cópulas completas/ montas totales x 100) fue menor (p<0,05) en las estaciones de otoño e invierno (32 y 25% respectivamente) respecto de la primavera y el verano (65 y 55% respectivamente) (Figura 2).

Las concentraciones de testosterona plasmática fueron más bajas (p<0,05) en otoño e invierno, hasta alcanzar un máximo valor (p<0,05) al comienzo del verano (13,2 ng/ml), para posteriormente disminuir hacia el final de la estación (Figura 3).

Figura 1 Variación mensual (promedio ± EE) de la circunferencia escrotal (A), volumen testicular (B) y peso testicular (C) de ambos testículos en carneros Texel. Letras diferentes indican diferencias significativas (p<0,05). 

Los 192 eyaculados colectados de los carneros Texel fueron evaluados y los resultados de calidad espermática se presentan en la Tabla 1. Los promedios para las variables VOL, TESPZ, MIP y porcentaje de EV disminuyeron desde el máximo valor (p<0,05) en el otoño hasta alcanzar el mínimo en la primavera. No se observaron diferencias (p>0,05) entre estaciones en la concentración espermática (CONC), el pH y el Vigor.

Tabla 2: el porcentaje de espermatozoides normales (EN) fue similar (p>0,05) entre estaciones. El porcentaje de espermatozoides con anormalidades a nivel de la cabeza (EACA) se incrementó desde el otoño/invierno hasta alcanzar el máximo (p<0,05) en el verano. En el otoño se observaron los mayores (p<0,05) porcentajes de espermatozoides con anormalidades a nivel de la pieza intermedia (EAPI) y cola (EAC).

La glucosa presentó la menor concentración en el otoño (p<0,05) respecto del resto de las estaciones. Las enzimas AST, GGT y ALP presentaron las menores concentraciones en el verano (p<0,05). En contraste, la enzima ALT presentó las mayores concentraciones en el verano y el otoño (p<0,05); a su vez, la enzima LDH presentó una mayor concentración en el otoño (p<0,05), como indica la Tabla 3.

Figura 2 Variación mensual (promedio ± EE) del N° de montas totales, cópulas completas (A) y eficiencia de servicio (%) (B) (Acontrastes entre estaciones) en carneros Texel. Letras diferentes indican diferencia significativa (p<0,05). 

Figura 3 Variación mensual (promedio ± EE) de la concentración de testosterona plasmática en carneros Texel. Letras diferentes indican diferencias significativas (p<0,05). 

Discusión

El objetivo del presente estudio fue evaluar las características reproductivas de carneros Texel de dos años de edad, durante un año calendario. A su vez, se propuso conocer la concentración de glucosa y de varias enzimas presentes en el plasma seminal que tuvieran relación con los parámetros de calidad espermática.

El PV aumentó continuamente desde el inicio del estudio (otoño) y alcanzó al finalizar el mismo, el 65% del peso adulto estimado para la raza. Varios autores demostraron que la medida de la CE presenta una alta correlación con el PT, el VT y la capacidad espermatogénica ³.

En los carneros Texel, los mayores valores de CE, PT y VT se registraron en el verano y el otoño (fotoperíodo decreciente) y los menores valores, en el invierno y la primavera (fotoperíodo creciente). Este efecto sería la consecuencia de que el inicio del fotoperíodo decreciente está precedido por una estimulación del eje hipotálamo-hipofisario, que conduce a un incremento en la secreción pulsátil de LH y liberación de FSH ¹⁹.

Al mismo tiempo, aumenta la cantidad de receptores para estas hormonas a nivel testicular y -en consecuenciase produce un crecimiento nuclear de las células de Sertoli y multiplicación de las células de Leydig ⁸. Otros autores observaron variaciones estacionales similares en razas Texel, Suffolke Ile-de-France ⁽¹⁷, Suffolk 18 y Corriedale ²⁰.

La prueba de CS es útil para detectar individuos con baja líbido o habilidad copulatoria y presenta una moderada heredabilidad (0,22) y alta repetibilidad (0,72) en pruebas sucesivas ²³. En el presente estudio, la CS se manifestó durante todo el año, observándose que el número de cópulas completas no fue diferente entre las estaciones; sin embargo, el número de montas totales fue mayor en el invierno (fotoperíodo creciente), por lo tanto, la eficiencia de servicio fue baja en el otoño e invierno.

Este efecto podría atribuirse a la falta de experiencia sexual al inicio del experimento, por lo que los carneros debieron realizar un mayor número de montas por cada cópula completa. En un grupo de carneros sexualmente inexpertos, se observó que entre el 20 y 35% son sexualmente inactivos cuando fueron expuestos por primera vez a las hembras ²¹. Los resultados obtenidos en este trabajo indicaron que, en carneros jóvenes, una exposición a ovejas sostenida en el tiempo, mejoró su desempeño sexual.

Las máximas concentraciones de testosterona plasmática se determinaron en verano (enero, fotoperíodo decreciente), debido a que en la estación previa a la época reproductiva existe un aumento de receptores de LH a nivel testicular, encargada de estimular la producción de testosterona por parte de las células de Leydig ¹⁹. Concentraciones similares fueron observadas en la raza Pelibuey ¹⁰ y en las razas Corriedale y Pampinta ¹. Este último estudio fue realizado en la misma latitud que el presente trabajo.

La evaluación del semen fresco permite excluir los eyaculados que no son aptos para las técnicas de reproducción asistida. Los resultados del presente estudio muestran que los carneros Texel de dos años de edad en crecimiento, son capaces de producir semen viable en todas las estaciones, especialmente invierno.

El mayor volumen seminal se registró en el otoño, sin embargo, la concentración espermática no varió entre estaciones, lo cual llevó a obtener un mayor número de espermatozoides totales en esa estación. Similares resultados se registraron en carneros de razas Karakul ¹², Chios y Friesan ¹³.

Los parámetros cinéticos espermáticos disminuyeron principalmente en la primavera, producto del foto-período creciente y no se observó una relación entre dichos parámetros y las anormalidades a nivel de la cola, coincidiendo con lo informado por Colas y Guerin en 1980 ⁵.

Los porcentajes totales de anormalidades espermáticas no variaron entre estaciones; sin embargo, el mayor porcentaje de anormalidades a nivel de la cabeza se encontró en el verano, debido probablemente al estrés térmico que afectó la termorregulación testicular ¹⁶. En resumen, los mejores valores observados en las características seminales fueron en el otoño e invierno.

La composición de azúcares del plasma seminal es fundamental para el metabolismo y la motilidad de los espermatozoides. Luego de la eyaculación, los azúcares son consumidos por los espermatozoides, por lo tanto, existe una correlación negativa entre la concentración de glucosa y el total de espermatozoides.

En el presente estudio se observó una menor concentración de glucosa en el otoño, coincidentemente con el mayor número de espermatozoides totales y el mayor porcentaje de motilidad total. Esta relación podría interpretarse considerando que, a mayor número de espermatozoides motiles, aumenta el consumo de glucosa ²⁹.

La actividad de las enzimas transaminasas AST y ALT se relaciona negativamente con la motilidad, la concentración espermática y la estabilidad de la membrana plasmática del espermatozoide ⁷. Estas relaciones no se observaron durante este experimento y teniendo en cuenta que son enzimas de origen testicular y epididimario, probablemente exista una falta de homogeneidad en el metabolismo de la AST y ALT en los carneros jóvenes.

Por otro lado, fue observado que los incrementos de AST y ALT se asociaron con el incremento de las alteraciones o anormalidades de los espermatozoides ²⁵. En el presente trabajo se observó una relación positiva entre la concentración de ALT y las anormalidades espermáticas de la pieza intermedia y la cola en el otoño.

La enzima GGT no es necesaria per se para la función reproductiva, pero cumple una función importante en el sistema de glutatión peroxidasa, que está implicada en la protección de los espermatozoides contra los radicales libres ³⁰. La baja concentración de glutatión peroxidasa por falta de GGT produce espermatozoides defectuosos y disminución en la motilidad espermática ⁹.

La baja concentración de GGT determinada en el verano coincidió con el mayor porcentaje de anormalidades espermáticas a nivel de la cabeza y con el menor porcentaje de motilidad total en la misma estación. En consecuencia, la determinación de la concentración de GGT en el plasma seminal, podría utilizarse como un marcador de funcionalidad prostática e indicador de la presencia de anormalidades espermáticas; sin embargo, se requieren concentraciones elevadas de GGT en el plasma seminal para mitigar el efecto de los radicales libres.

Las enzimas ALP y LDH están involucradas en las reacciones glucolíticas, en las cuales proveen energía en forma indirecta para la sobrevivencia, la motilidad y la fertilidad de los espermatozoides ²⁸. En este estudio, las mayores concentraciones de ALP en el otoño, invierno y primavera coincidieron con los mayores valores de motilidad individual progresiva, lo cual indicaría que la enzima ALP tiene una relación positiva con la cinética de los espermatozoides. Sin embargo, otros autores determinaron una correlación negativa entre los niveles de ALP y la motilidad espermática en búfalos (Bubalus bubalis)⁶.

En el equino, se observó que la concentración de ALP presentó una correlación positiva con la concentración espermática, por lo cual se postuló que los testículos y el epidídimo son los responsables de la producción de ALP ¹⁴. Sin embargo, esta relación no se observó en el presente estudio, probablemente porque la ALP en el carnero proviene principalmente de las vesículas seminales y en menor medida de los testículos y epidídimos ².

La enzima LDH se localiza a nivel del citosol y en las mitocondrias espermáticas. Al ser una enzima intracelular, el incremento de la concentración en plasma seminal indicaría anormalidades o daño en la membrana espermática ²⁴. En el presente estudio se observó una relación entre la concentración de LDH y los mayores porcentajes de anormalidades espermáticas a nivel de la pieza intermedia y de la cola en el otoño.

En consecuencia, la determinación de la concentración de LDH en el plasma seminal podría utilizarse como un indicador indirecto de la presencia de anormalidades espermáticas. Por otro lado, una correlación negativa entre el nivel de LDH y el porcentaje de espermatozoides vivos fue observada en carneros de raza Moghani ³¹.

Esta relación no se observó en este experimento, ya que la mayor concentración de LDH se registró en el otoño en coincidencia con un elevado porcentaje de espermatozoides viables. El incremento de los niveles de LDH en el otoño, probablemente no se deba a la mortalidad espermática en el eyaculado, sino que podría ser atribuido a un signo de degeneración y destrucción a nivel de las espermatogonias ⁴, indicando algún grado de inmadurez en la espermatogénesis cuando los carneros no alcanzaron la madurez sexual.

En conclusión, el estudio demuestra que las características reproductivas evaluadas en carneros Texel de dos años de edad, presentan variaciones estacionales marcadas y soportan la hipótesis que el otoño e invierno son las estaciones del año con la mejor aptitud reproductiva en la latitud estudiada. Además, algunas enzimas del plasma seminal podrían ser de utilidad para evaluar la calidad seminal.