Spanish (pdf)
Article in xml format
Article references
Automatic translation
Send this article by e-mail
Cited by SciELO 
Similars in
SciELO 
Permalink
Introducción
La anemia infecciosa equina (AIE) es una enfermedad causada por un virus específico de los équidos, del género Lentivirus y la familia Retroviridae, relacionado con el virus de la inmunodeficiencia humana, HIV-I. El virus AIE frecuentemente puede inducir una considerable morbilidad y mortalidad y los animales infectados permanecerán en esa condición por el resto de su vida 1.
Se mencionan principalmente dos vías de contagio, una forma horizontal donde la enfermedad se produce a través del contacto con sangre contaminada, de forma natural a través de insectos hematófagos (Tabanus spp.) o iatrogénica por inyecciones, y por otro lado, la forma de transmisión vertical, cuando se transmite de madre gestante a cría por vía placentaria 12.
Las diferentes formas clínicas de la enfermedad son: aguda, crónica y asintomática. La aguda generalmente ocurre en la fase inicial de replicación viral con un cuadro de fiebre y trombocitopenia severa, que en algunos casos los animales no superan tal etapa y mueren. Los caballos infectados a menudo se recuperan tornándose en portadores crónicos de la infección.
Esta forma acompaña al animal de por vida, el caballo afectado con la AIE crónica ha perdido su salud, se presenta letárgico, anoréxico, con un hematocrito bajo y una persistente trombocitopenia, eventos que coinciden con los episodios de fiebre 4.
Ante la ausencia de vacunas, el control epidemiológico de AIE se resume a la identificación y segregación de animales serológicamente positivos por medio del diagnóstico, por ello es importante disponer de técnicas diagnósticas eficaces 1.
La Organización Mundial de la Salud Animal (OIE) recomienda como método diagnóstico de elección al test de Coggins por medio de la prueba de inmuno difusión en gel de agar (IDGA), desarrollada por Leroy Coggins en 1972, por ser una prueba que detecta proteínas de la cápside viral, con máxima seguridad en los portadores de virus sin manifestaciones clínicas 14.
A lo largo del tiempo se han desarrollado diferentes tests para el diagnóstico de AIE, que buscan mejorar las opciones disponibles. Uno de ellos, desarrollado a fines de la década de 1980, es el “enzimo inmuno ensayo” para el diagnóstico de AIE. A fines de 1980 fue desarrollado un test de ELISAc de competición, el cual tuvo muy buena concordancia con las técnicas de IDGA, y pudo demostrarse que el mismo tuvo una alta sensibilidad, pero no especificidad como el test de Coggins, ya que puede generar reacciones cruzadas con otros virus 7.
En Argentina, la AIE se encuentra reglamentada por el ente que regula la sanidad animal -SENASA- que establece el diagnóstico serológico, la denuncia obligatoria, la interdicción preventiva ante la presencia de casos y la eliminación de animales enfermos y portadores 2.
El objetivo de este trabajo fue evaluar el comportamiento de la técnica de ELISAc en comparación con los resultados obtenidos mediante IDGA para el diagnóstico serológico de AIE en equinos provenientes de zonas endémicas del nordeste argentino.
Material y métodos
Muestras de equinos
El trabajo se realizó con muestras de 94 equinos de diferentes establecimientos del nordeste argentino, zona en la cual la enfermedad es endémica. Las mues tras procedían de la seroteca del laboratorio de la Cátedra de Enfermedades Infecciosas de la FCV-UNNE. Se llevó a cabo el diagnóstico por medio de la técnica de IDGA y luego por la de ELISAc de competencia.
Test de coggins (IDGA)
Se utilizó el kit comercial VMRD INC Equine-Test kit, que contiene antígeno p26 y sigue el protocolo del fabricante y la normativa vigente de la OIE. Por su parte, el Comité de Bioética de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNNE asignó el protocolo de aprobación No0072 para realizar el trabajo.
Ensayo de competencia de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISAc)
Se utilizó un kit comercial de ELISAc de labora torios IDEXX®. Este ELISAc de competición detecta anticuerpos utilizando un antígeno de AIE purificado y anticuerpos monoclonales frente a la proteína de la cápside viral p26 (OIE, 2004) 10. Se procedió según protocolo del fabricante y la lectura de la placa se realizó en un lector de ELISAc (ELX 800), 630 nm.
La interpretación de los resultados se realizó teniendo en cuenta el punto de corte del control positivo (0,269), es decir que aquellas muestras que evidenciaron una densidad óptica menor o igual al control positivo, fueron consideradas positivas y aquellas con una densidad óptica mayor al control positivo fueron consideradas negativas.
Resultados
Sobre un total de 94 muestras analizadas, se obtuvieron 66 resultados negativos y 28 positivos en cada una de las técnicas, como se muestra en la Tabla 1. Cabe aclarar que no todas las muestras coincidieron en sus resultados.
Las concordancias entre la técnica de ELISAc comparada con la de referencia IDGA, con un nivel de confianza del 95%, arrojó un coeficiente Kappa de 0,89. La interpretación de estos coeficientes se realizó siguiendo una escala establecida por Landis y Koch 9, con lo cual se establece que la correlación entre IDGA y ELISAc fue muy buena en este ensayo.
Tabla 1 Cuadro de contingencia de resultados de IDGA y ELISAc sobre muestras de sueros de 94 equinos de una zona endémica de Argentina.
| IDGA positivo negativo | total | ||
|---|---|---|---|
| ELISAc positivo negativo | 26 2 | 2 64 | 28 66 |
| total | 28 | 66 | 94 |
Tabla 2 Análisis ROC para IDGA y ELISAc aplicados sobre 94 sueros de equinos de una zona
| cantidad de sueros (n) | (+) IDGA (n) | (-) IDGA (n) | AUC (95%IC) | Se (%) | Sp (%) | 1Y |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 94 | 28 | 66 | 0,997 | 100 | 95,45 | 0,95 |
El análisis ROC entre IDGA y ELISAc (Tabla 2) reveló que con una sensibilidad del 100% y una especificidad del 95,45%, de las 28 muestras positivas para IDGA, 26 resultaron positivas para ELISAc. El AUC obtenido fue de 0,997 y el Indice de Youden (IY) fue de 0,95, demostrando que es una técnica eficaz para el diagnóstico de AIE, en las condiciones evaluadas.
Una prueba con discriminación perfecta tiene una curva ROC con 100% de sensibilidad y 100% de especificidad cerca de la esquina superior izquierda. Debido a ello, cuanto más cerca esté la curva de la esquina superior izquierda, mayor será la precisión de la prueba 15.
Discusión
Los resultados de la técnica ELISAc demostraron una concordancia muy buena (0,89) con la IDGA y un excelente rendimiento del análisis ROC. Eventualmente, con la técnica de ELISAc se pueden descubrir animales positivos antes que puedan ser detectados por IDGA, debido a que esta prueba tiene una alta sensibilidad y especificidad, dado que se usa antígeno de AIE purificado y anticuerpos monoclonales frente a la p26.
Debido a las bondades de la prueba de ELISAc, las probabilidades de un falso positivo o falso negativo son muy bajas en comparación al IDGA (11. Los resultados de sensibilidad (100%) y especificidad (95,45%) muestran que la técnica ELISAc es de utilidad para su uso masivo. Como ventaja frente a la IDGA presenta la rapidez con la que define los resultados.
Investigadores venezolanos realizaron un ensayo comparando ambas técnicas utilizando un kit de ELISAc de laboratorios IDEXX y obtuvieron una concordancia moderada con un valor Kappa de 0,53, una sensibilidad de 100% y una especificidad de 97%. Estos autores 6 resaltaron que es una prueba más sensible que IDGA, y que puede detectar más tempranamente el animal positivo.
En un ensayo realizado con 91 muestras de equinos utilizando el mismo test de ELISAc, obtuvieron valores de Kappa 0,82, sensibilidad del 92% y especificidad del 90% 3. El AUC fue 0,96 y el índice de Youden 0,82, lo cual indica que el rendimiento de ELISAc fue satisfactorio.
Por otra parte, y con respecto del momento a partir del cual las técnicas serían capaces de detectar como positivos a animales infectados, otros investigadores en un estudio de inoculación experimental 5, reportaron sero-negatividad a la IDGA en el 25% de casos, hasta por lo menos 180 días post-inoculación, mientras que las técnicas de ELISAc a partir de los 35 días ya arrojaron resultados positivos.
Recientes investigaciones apoyan la aseveración que a través de un ELISAc se pueden detectar animales infectados en estadios tempranos de la enfermedad. Se ha descrito que el periodo de incubación del virus de la AIE va a depender de la dosis del inóculo y la especie equina afectada, pero se estima entre 21 y 28 días, pudiendo ser mayor si la cepa involucrada posee una menor capacidad de virulencia.
En este trabajo el test de ELISAc ha demostrado muy buenos resultados arrojando una sensibilidad del 100% y una especificidad del 95,45% con valores Kappa de 0,89. Teniendo ello en cuenta y sabiendo la importancia que tiene contar con un diagnóstico efectivo y rápido para mejorar las situaciones contra la lucha de esta enfermedad, sería de gran importancia poder incorporar dicha práctica en la rutina diaria, principalmente como técnica screening para esta enfermedad.
