Resumo

PIANCIOLA, Luis Alfredo; LEONOR MAZZEO, Melina; FLORES, Darío  e  HOZBOR, Daniela Flavia. Desenvolvimento e validação de uma PCR múltipla para o diagnóstico de Bordetella spp. Acta bioquím. clín. latinoam. [online]. 2012, vol.46, n.4. ISSN 0325-2957.

O objetivo do trabalho foi desenhar e validar uma reação em cadeia da polimerase (PCR) em formato convencional que permita confirmar a presença ou ausência de Bordetella pertussis e detectar outras espécies do gênero, como Bordetella parapertussis e Bordetella bronchiseptica, que pudessem estar envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Para tal, foi desenhada uma PCR múltipla que amplifica uma sequência do promotor do gene de Toxina Pertussis e outra do gene da Toxina Adenilato Ciclase-Hemolisina. A metodologia foi validada seguindo esquemas publicados anteriormente. Foram otimizadas as condições da PCR. Validou-se a metodologia obtendo-se um limite de detecção para ambas as sequências de 0,5 bactérias por reação. Validou-se também a especificidade e robustez da técnica. Apresenta-se uma nova ferramenta diagnóstica otimizada e validada, que permite detectar a presença das espécies de Bordetella mais frequentemente envolvidas no quadro clínico de coqueluche. Seu uso combinado com alguma das PCR habituais em diagnóstico, como a PCR IS481, permite aumentar a sensibilidade do diagnóstico desta doença, a especificidade do mesmo discriminando os resultados falsos positivos/negativos e aumentar o conhecimento sobre os agentes etiológicos envolvidos nesta patologia.

Palavras-chave : Bordetella pertussis; Bordetella parapertussis; Bordetella bronchiseptica; Reação em cadeia de Polimerase.

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